實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)在豬病防控中的應(yīng)用

    近年來，我國豬病的種類越來越多，老病新發(fā)或新的疾病不斷暴發(fā)流行，癥狀日益復(fù)雜，隱性感染、非典型癥狀和混合感染無處不在，僅靠流行病學(xué)、臨床癥狀和病理變化難以確診，不能及時(shí)準(zhǔn)確制定防控措施，往往貽誤疾病治療的最佳時(shí)機(jī)，導(dǎo)致豬群大量死亡。因此，采集病豬或死豬相關(guān)組織作為病料，進(jìn)行病原檢測(cè)是輔助豬病診斷的重要手段，只有查明病原才能更好地、有針對(duì)性地采取相應(yīng)的防治措施，減少臨床工作的盲目性，以達(dá)到預(yù)防、控制和撲滅傳染病的目的，從而使養(yǎng)殖場(chǎng)/戶的損失降到最低。另一方面，目前市場(chǎng)上疫苗廠家眾多，疫苗質(zhì)量參差不齊，疫苗的免疫效果會(huì)受到儲(chǔ)存、運(yùn)輸和免疫操作等多個(gè)環(huán)節(jié)影響，實(shí)驗(yàn)室可檢測(cè)保護(hù)性抗體出現(xiàn)時(shí)間、維持時(shí)間、離散度和最高滴度等指標(biāo)，評(píng)估疫苗免疫效果，為疫苗選擇及制定科學(xué)免疫程序提供參考。此外，社會(huì)上還出現(xiàn)了大量傳播謠言的人，他們受經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，對(duì)疫苗市場(chǎng)進(jìn)行炒作，引起廣大百姓的思想誤區(qū)。因此，只有開展實(shí)驗(yàn)室診斷工作才能更好地為廣大獸醫(yī)工作者和養(yǎng)殖場(chǎng)/戶服務(wù)，才能更好地做好規(guī)模化豬場(chǎng)疫病綜合防控與凈化工作。而病料采集、保存、 送檢的方法是否正確，直接影響到檢驗(yàn)的結(jié)果和防治工作的開展。鑒于部分養(yǎng)殖戶和相關(guān)專業(yè)技術(shù)人員對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及應(yīng)注意的事項(xiàng)不太清楚或認(rèn)識(shí)上存在誤區(qū)，筆者就多年從事實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的心得體會(huì)及注意事項(xiàng)進(jìn)行論述，以期為廣大基層獸醫(yī)工作者提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)室開展的檢測(cè)工作

    實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的內(nèi)容很多，目前臨床應(yīng)用較多的是抗體檢測(cè)和病原檢測(cè)，可根據(jù)自己的需求進(jìn)行選擇，現(xiàn)主要介紹一下抗體檢測(cè)和病原檢測(cè)情況。

1.1 抗體檢測(cè)

    抗體檢測(cè)指在體外進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)，其基本原理就是利用抗原可與相應(yīng)的抗體特異性結(jié)合的特性，利用已知的抗原來檢查血清或其它樣品中是否含有相應(yīng)的抗體，目前普遍采用的是ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）方法，檢測(cè)血清中某種病原的抗體含量。該法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、時(shí)間短、可同時(shí)檢測(cè)大量樣本，對(duì)人員要求不高。但也存在一些問題，大部分試劑盒不能區(qū)分野毒和疫苗毒，有的病原抗體的檢測(cè)水平與保護(hù)力并沒有太大相關(guān)性，僅能作為疫苗免疫后產(chǎn)生免疫力的依據(jù)或感染發(fā)生的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)室目前主要使用的是已經(jīng)商品化的試劑盒。目前也有不少企業(yè)研發(fā)出了豬病抗體膠體金快速檢測(cè)卡，也可用于抗體的快速檢測(cè)，主要應(yīng)用于豬場(chǎng)疾病的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

1.2 病原檢測(cè)

    病原檢測(cè)分兩種：一種是采用某種方法，如細(xì)菌培養(yǎng)、動(dòng)物接種等直接檢測(cè)某種病原微生物是否存在；另一種是采用PCR等方法，檢測(cè)樣品中某種病原微生物的核酸是否存在，從而間接反應(yīng)某種病原微生物是否存在。第一種方法做起來費(fèi)時(shí)費(fèi)力，第二種方法便利快捷，在較短時(shí)間就能得到結(jié)果，所以目前病原檢測(cè)主要采用的是第二種方法。PCR 檢測(cè)針對(duì)的是病原，針對(duì)性強(qiáng)、可確診，可區(qū)分野毒與疫苗毒，熒光定量 PCR檢測(cè)方法可確定病毒載量，確定發(fā)病的主要原因，但PCR 檢測(cè)對(duì)人員和儀器有一定的要求，需專業(yè)人員操作，專業(yè)人員需要有一定的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。

2 檢測(cè)對(duì)豬病防控的意義

    病原檢測(cè)的意義是了解豬群是否感染某種病原，假如感染，陽性率是多少，調(diào)查某種疾病的流行情況，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)豬場(chǎng)開展疾病凈化相關(guān)工作，采取相應(yīng)的措施，隔離或撲殺陽性感染豬，建立陰性種豬群，實(shí)行全進(jìn)全出等措施，從而徹底根除某種疾病在豬場(chǎng)的流行。在疾病初期進(jìn)行診斷，實(shí)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)、早治療，用疫苗緊急接種，防控疾病大規(guī)模的暴發(fā)和流行。通過抗體檢測(cè)可以了解豬群的整體免疫狀況，從而把握整個(gè)豬群的健康狀況，弄清楚豬群注射疫苗后是否產(chǎn)生抗體及抗體量的多少，以此判斷疫苗的免疫效果，及早發(fā)現(xiàn)問題，及早采取措施，為下一步的疫苗選擇和免疫程序的制定提供依據(jù)。

3 送檢樣品的要求

    送檢的樣品是實(shí)驗(yàn)室能否做出正確檢測(cè)結(jié)果的前提和基礎(chǔ)，送檢樣品不合格可能做出錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果，造成誤診，耽誤疾病的治療。現(xiàn)簡(jiǎn)單介紹一下樣品的采集、保存和運(yùn)輸途中應(yīng)注意的一些事項(xiàng)。樣品主要包括血清和病料兩個(gè)主要部分，現(xiàn)分別進(jìn)行闡述。

3.1 抗體檢測(cè)樣品

    送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)血清樣品一般有兩個(gè)目的，一是做血清抗體的普查，即檢驗(yàn)豬只的免疫情況及效價(jià)的高低，另一種目的是用于未注射疫苗豬群的疾病監(jiān)測(cè)，如果是以抗體的普查為目的，要注意采樣一定要有統(tǒng)計(jì)意義，按照豬場(chǎng)的規(guī)模采取一定分布和數(shù)量的樣品。對(duì)于以疫病監(jiān)測(cè)為目的，一定注意當(dāng)發(fā)現(xiàn)突然死亡或死因不明的病畜尸體，必須先采集耳靜脈等末梢血液，涂片鏡檢，在認(rèn)定不是炭疽時(shí)，才允許解剖和全面采集病料。對(duì)血清樣品一般從前腔靜脈或耳緣靜脈采血2～5mL，盡可能防止血樣在采集過程中被污染，一旦污染細(xì)菌可能會(huì)影響監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，如果有條件的話最好能將血清分離后送檢血清。方法為待血液凝固后，將析出的血清轉(zhuǎn)移至離心管，3 000 r/min 離心10min，取上清液置于1.5ml滅菌離心管內(nèi)，做好標(biāo)記送檢，也可以直接送檢采集好的血樣，注意運(yùn)輸途中要冷藏保存，以防血樣腐敗變質(zhì)，最好 4 ℃，不能凍結(jié)，否則會(huì)造成溶血，影響檢測(cè)結(jié)果，盡快將血樣送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，一般不超過24 h。

3.2 病原檢測(cè)樣品

    采集病料進(jìn)行病原分離和檢測(cè)時(shí)，要保證病料的新鮮，一定要取適宜的病料和病變的典型部位，對(duì)檢測(cè)細(xì)菌樣品的病料最好是沒有經(jīng)抗生素治療的動(dòng)物。如果病料取的部位不正確也能造成假陰性的結(jié)果，比如豬瘟，以前有送檢人員取的是肝臟，這是錯(cuò)誤的，采集的病料應(yīng)盡可能的齊全，混合一起進(jìn)行檢測(cè)，避免漏檢，提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。關(guān)于豬的常見病病料應(yīng)該采集的部位在下面將作詳細(xì)論述，采集病料時(shí)盡量無菌操作，動(dòng)作要盡可能快，所用器械、容器都必須消毒滅菌，減少樣品被污染的可能性，要在病豬死亡后6 h 內(nèi)采集病料。要將病料盡快送達(dá)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，不能送腐敗變質(zhì)的病料，病料運(yùn)輸途中一定要保持低溫，防止途中變質(zhì)，但也要避免病料的反復(fù)凍融，最好能在24 h 內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

3.2.1 豬病毒性病料應(yīng)該采集的部位

    豬瘟主要采集扁桃體、淋巴結(jié)和脾臟，豬藍(lán)耳病主要采集肺臟和淋巴結(jié)，豬圓環(huán)病毒病主要采集淋巴結(jié)、脾臟和肺臟，豬偽狂犬病主要采集腦、扁桃體、淋巴結(jié)和脾臟，豬乙型腦炎主要采集腦、腹股溝淋巴結(jié)、流產(chǎn)胎兒，豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉主要采集空腸、腸內(nèi)容物和腹股溝淋巴結(jié)、 腸系膜淋巴結(jié)，豬細(xì)小病毒主要采集流產(chǎn)或死產(chǎn)胎兒的腎、肺、肝、腦、睪丸和胎盤、仔豬腸系膜淋巴結(jié)、肝臟、母豬血樣，口蹄疫主要采集潰爛或潰瘍的表皮組織、水泡皮或水泡液，豬流感主要采集鼻腔液體，豬捷申病主要采集腦、脊髓、腸系膜淋巴結(jié)和扁桃體。

3.2.2 豬細(xì)菌疾病病料的采集部位

    豬大腸桿菌病主要采集腸系膜淋巴結(jié)、肝和脾，豬鏈球菌病主要采集心血、肝、 脾、淋巴結(jié)、關(guān)節(jié)腔內(nèi)液體滲出物及腦，副豬嗜血桿菌病主要采集心血、脾及淋巴結(jié)，豬巴氏桿菌病主要采集心血、脾及淋巴結(jié)，豬傳染性萎縮性鼻炎主要采集鼻腔分泌物，豬梭菌性腸炎主要采集腹水和腸道分泌物，豬丹毒桿菌病主要采集心、肝、脾和淋巴結(jié)，豬傳染性胸膜肺炎主要采集肺氣管、肺門淋巴結(jié)和鼻腔分泌物，豬副傷寒主要采集心血、肝、 脾和淋巴結(jié)，豬布魯氏菌病主要采集流產(chǎn)胎盤、陰道分泌物，豬痢疾主要采集帶血的新鮮糞便、腸內(nèi)容物和結(jié)腸黏膜刮取物，仔豬紅痢主要采集空腸內(nèi)容物，豬支原體肺炎主要采集肺臟，豬鉤端螺旋體病主要采集肝、脾、 腎、 淋巴結(jié)，豬衣原體病主要采集肝、脾、 肺及流產(chǎn)胎兒。

3.2.3 豬寄生蟲性病料應(yīng)該采集的部位 

    弓形蟲病主要采集抗凝血和肺臟，球蟲病主要采集糞便。

4 檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)

    實(shí)驗(yàn)室不僅要及時(shí)、準(zhǔn)確地對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，有時(shí)也需要對(duì)得到的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、分析和匯總，否則養(yǎng)殖戶不能準(zhǔn)確理解數(shù)據(jù)的意義。向養(yǎng)殖戶提供準(zhǔn)確的建議和報(bào)告，如陽性率、陰性率、差異度等，從而更好的指導(dǎo)臨床用藥，對(duì)當(dāng)前的免疫程序、用藥情況、疫苗質(zhì)量等提出意見和建議，真正地為豬場(chǎng)服務(wù)，做到“檢有所值，檢有所用”，并進(jìn)行可持續(xù)的跟蹤服務(wù)，將實(shí)驗(yàn)室的作用發(fā)揮到最大。

5 小結(jié)

    獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室在豬病防控中起著非常重要的作用，不論是病原檢測(cè)還是抗體檢測(cè)都應(yīng)該追求高標(biāo)準(zhǔn)、 高質(zhì)量，將檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷結(jié)合起來，將檢測(cè)與分析統(tǒng)一結(jié)合起來，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)雖不能解決豬場(chǎng)所有的問題，但可解決部分緊急問題。降低豬場(chǎng)養(yǎng)殖成本，避免大規(guī)模傳染病的發(fā)生，尤其是規(guī)模較大的豬場(chǎng)，更應(yīng)該重視實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的作用，否則可能造成不可估量的損失，有條件的話最好能建立自己的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室或依托可靠的合作單位，如果采取臨時(shí)抱佛腳式的檢測(cè)，會(huì)產(chǎn)生很多時(shí)間和信任成本。對(duì)豬場(chǎng)疾病的防控應(yīng)重視預(yù)防和檢測(cè)，檢測(cè)可以貫穿于整個(gè)生產(chǎn)過程中的疫病防控，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)應(yīng)秉承“專業(yè)、高效、及時(shí)、準(zhǔn)確”的服務(wù)宗旨，“客觀、獨(dú)立、公正、嚴(yán)謹(jǐn)”的原則，提升自身創(chuàng)新力、市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力、打造社會(huì)公信力，為規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)提供及時(shí)、準(zhǔn)確、權(quán)威的檢測(cè)報(bào)告。同時(shí)，檢測(cè)中心將“養(yǎng)大于防、防大于治”的養(yǎng)殖理念與養(yǎng)殖體檢結(jié)合，實(shí)現(xiàn)全方位的養(yǎng)殖防控?cái)?shù)據(jù)服務(wù)體系，從而真正實(shí)現(xiàn)養(yǎng)殖效益的最大化。隨著豬病的不斷增多和病情的復(fù)雜化，各地“草根實(shí)驗(yàn)室” 和各集團(tuán)公司的中心實(shí)驗(yàn)室紛紛建立，并在豬病防控中發(fā)揮了巨大作用。將各種實(shí)驗(yàn)室的作用結(jié)合起來，取長(zhǎng)補(bǔ)短，才能更好地服務(wù)于生產(chǎn)一線。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果受到樣品、人員、儀器設(shè)備檢測(cè)試劑、檢測(cè)環(huán)境等多種因素的影響，為保障實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)效果的準(zhǔn)確性，應(yīng)從以下幾個(gè)方面進(jìn)行控制：①加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的管理，制定一系列的規(guī)章制度，并嚴(yán)格執(zhí)行；②采集合適的樣品，并及時(shí)正確的送檢；③加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的管理，定期開展技能考核，盡量減少人為因素造成的試驗(yàn)結(jié)果誤差；④定期開展培訓(xùn)，使實(shí)驗(yàn)室人員不斷學(xué)習(xí)，及時(shí)掌握最新、有效的檢測(cè)方法，對(duì)檢測(cè)結(jié)果分析要科學(xué)和全面，根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)作出合理的判斷，制定科學(xué)的豬病防控措施。相信在不久的將來，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)會(huì)在豬病的防控工作中發(fā)揮更加重要的作用。