電鏡: 但是電鏡并不足以說明分子水平的機制 WB: 這類WB,經(jīng)常會±自噬抑制劑來進行實驗,看看是不是與自噬有關(guān)。 當然,就算是LC3 I和LC3 II,看上去結(jié)果也是比較單薄的,于是就誕生了GFP-Atg8/LC3,用融合的GFP被降解下來,說明自噬的形成: 同樣,也有用熒光電鏡來檢測的: 這種降解GFP的方法可以驗證自噬,但其實更直接的方法,就是直接給自噬體加上熒光,然后用confocal來進行驗證: 流式也能說明自噬體形成的問題: 除了自噬本身的標記蛋白LC3或者Atg以外,還有很多自噬底物的檢測,比如SQSTM1這樣的蛋白: 自噬被抑制后,這個蛋白就開始累積了。它也叫P62。 MTOR, AMPK,Atg1/ULK1的激酶活性也是檢測自噬的常見橋段: 常見的內(nèi)源性的WIPI檢測,但這個價錢就比較高了: |
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