參考教材一：人民衛(wèi)生出版社 《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)（第5版）》

參考教材二：人民衛(wèi)生出版社 《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》

【第一部分】骨髓細(xì)胞學(xué)檢查

骨髓細(xì)胞學(xué)檢查：通過普通顯微鏡進(jìn)行骨髓細(xì)胞學(xué)檢查，可以了解骨髓中各種血細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞形態(tài)有無異常等，從而診斷、協(xié)助診斷疾病，觀察療效及判斷預(yù)后。

一、骨髓細(xì)胞的類型

骨髓中血細(xì)胞包括粒細(xì)胞系統(tǒng)、紅細(xì)胞系統(tǒng)、單核細(xì)胞系統(tǒng)、淋巴細(xì)胞系統(tǒng)、漿細(xì)胞系統(tǒng)及巨核細(xì)胞系統(tǒng)等。此外，骨髓中還可見組織嗜堿細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、組織細(xì)胞、成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等。 

骨髓中血細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)可辨認(rèn)的發(fā)育階段分為原始細(xì)胞、幼稚細(xì)胞及成熟細(xì)胞三個階段。其形態(tài)特點(diǎn)見下圖：

血細(xì)胞發(fā)育過程中形態(tài)演變規(guī)律，見下圖：

二、骨髓穿刺的方法

骨髓穿刺部位選擇一般要從以下三個方面考慮：

①骨髓腔中紅骨髓要豐富；

②穿刺部位應(yīng)淺表、易定位；

③應(yīng)避開重要臟器。

1、常用的穿刺部位：

髂骨前、髂骨后上棘，胸骨、脛骨等。抽吸的骨髓量應(yīng)不超過 0.2ml。 

髂骨前、后上棘此部位骨質(zhì)薄，進(jìn)針容易，骨髓液豐富，被血液稀釋的可能性小，故髂后上棘為臨床上最理想穿刺部位。

2、取材情況判斷：  

(1)取材滿意

①抽吸骨髓液時，患者感到有瞬間的酸痛感(有的患者無這種感覺)；

②抽出的骨髓液中有較多的黃色小粒(多為骨髓小粒，有的是脂肪)；

③鏡檢見骨髓特有細(xì)胞：幼稚粒細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞、漿細(xì)胞、造骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肥大細(xì)胞、組織細(xì)胞、吞噬細(xì)胞等；

④中性桿狀核粒細(xì)胞/分葉核粒細(xì)胞比值大于外周血中性桿狀核粒細(xì)胞/分葉核粒細(xì)胞比值，有核細(xì)胞數(shù)大于外周血有核細(xì)胞數(shù)。

(2)取材失敗

①骨髓稀釋： 

a. 部分稀釋：抽吸骨髓液時混進(jìn)血液。骨髓小粒、油滴少或不見，骨髓特有細(xì)胞少，有核細(xì)胞少，成熟細(xì)胞/幼稚細(xì)胞＞3/5。 

b. 完全稀釋：抽出的骨髓液實(shí)際上就是血液，與血涂片的細(xì)胞成分完全一樣。

②干抽：是指非技術(shù)性原因而抽不出骨髓或只抽到少量血液。常見于原發(fā)性和繼發(fā)性骨髓纖維化、骨髓增生極度活躍、骨髓增生減低、腫瘤骨髓侵潤等情況。

三、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的步驟和內(nèi)容

1、低倍鏡觀察 

(1)判斷骨髓涂片質(zhì)量：觀察涂片厚薄、骨髓小粒多少、油滴、染色等，并可選擇滿意的區(qū)域用于有核細(xì)胞分類、計數(shù)。

(2)判斷骨髓增生程度：骨髓有核細(xì)胞的多少可以反應(yīng)出骨髓增生程度。 

(3)巨核細(xì)胞計數(shù)并分類：在低倍鏡下計數(shù)，在油鏡下分類

(4)全片觀察有無體積較大或成堆分布的異常細(xì)胞(尤其要注意觀察血膜尾部等邊緣部位)，如骨髓轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞、惡性組織細(xì)胞、惡性淋巴瘤細(xì)胞、戈謝細(xì)胞、尼曼-匹克細(xì)胞、海藍(lán)組織細(xì)胞等，

下圖：骨髓增生程度分級及標(biāo)準(zhǔn)

2、油鏡觀察：

在有核細(xì)胞計數(shù)、分類前，應(yīng)先觀察各系增生程度、形態(tài)、大致比例等情況，得出初步診斷意見；然后進(jìn)行細(xì)胞分類、計數(shù)及形態(tài)觀察，必要時細(xì)胞分類、計數(shù)應(yīng)在細(xì)胞化學(xué)染色后再進(jìn)行。細(xì)胞分類、計數(shù)時應(yīng)同時注意觀察細(xì)胞形態(tài)。

下圖：骨髓有核細(xì)胞計數(shù)及分類的方法

巨核細(xì)胞計數(shù)：由于涂片中巨核細(xì)胞較少，一般不歸入骨髓細(xì)胞有核細(xì)胞計數(shù)范圍，而是單獨(dú)對巨核細(xì)胞計數(shù)和分類。通常計數(shù)全片或1.5cm×3.0cm的血膜上中巨核細(xì)胞數(shù)并分類一定數(shù)量巨核細(xì)胞。

觀察內(nèi)容：應(yīng)觀察各系增生程度、各階段細(xì)胞比例及細(xì)胞形態(tài)。細(xì)胞形態(tài)的觀察應(yīng)全面，包括細(xì)胞胞體(如大小、形態(tài))、胞核(如核形、核位置、染色質(zhì)、核仁大小、核仁數(shù)量等)及胞質(zhì)(如量、顏色、顆粒、空泡等)的形態(tài)特點(diǎn)等，對于有病變的細(xì)胞系統(tǒng)觀察更應(yīng)仔細(xì)。

3、結(jié)果計算

(1)計算各系統(tǒng)細(xì)胞總百分比及各階段細(xì)胞百分比：一般情況下，百分比是指有核細(xì)胞的百分比(ANC)。在某些白血病中，還要計算出非紅系細(xì)胞百分比(NEC)，NEC是指去除有核紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞外的有核細(xì)胞百分比。

【小編注】

NEC是FAB協(xié)作組對AML進(jìn)行分型時要用的；而在最新的WHO 2016版造血與淋巴組織腫瘤分類中，NEC已經(jīng)沒什么用場了。

(2)計算粒紅比值(granulocyte/erythrocyte，G/E)：所謂粒紅比值是指各階段粒細(xì)胞(包括中性、嗜酸性、嗜堿粒細(xì)胞)百分率總和與各階段有核紅細(xì)胞百分率總和之比。

(3)計算各階段巨核細(xì)胞百分比或各階段巨核細(xì)胞的個數(shù)。

4、填寫骨髓細(xì)胞學(xué)檢查報告單

(1)填寫患者姓名、性別、年齡、科室、病區(qū)、床號、住院號、上次及本次髓涂片號、骨髓穿刺部位、骨髓穿刺時間、臨床診斷等。

(2)填寫骨髓涂片取材、制備和染色情況：可采用良好、尚可、欠佳三級評價標(biāo)準(zhǔn)。

(3)填寫骨髓報告單中各階段細(xì)胞百分比、骨髓增生程度、粒紅比值等。

(4)文字描述：包括骨髓涂片、血涂片及細(xì)胞化學(xué)染色三個部分組成。要求簡單扼要、條理清楚、重點(diǎn)突出。 

①骨髓涂片特征：主要包括粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、單核細(xì)胞系統(tǒng)的增生程度、各階段細(xì)胞比例及細(xì)胞形態(tài)。

②血涂片特征：有核細(xì)胞數(shù)量形態(tài)如何，紅細(xì)胞形態(tài)如何，血小板數(shù)量及形態(tài)如何，有無寄生蟲及其他異常細(xì)胞。

③細(xì)胞化學(xué)染色特征：逐項(xiàng)對每個細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行描述，每項(xiàng)染色結(jié)果的報告一般包括陽性率、陽性指數(shù)或陽性細(xì)胞的分布情況。

(5)填寫診斷意見及建議：根據(jù)骨髓象、血象、細(xì)胞化學(xué)染色及其他檢驗(yàn)，結(jié)合臨床資料提出臨床診斷意見或供臨床參考的意見，必要時提出進(jìn)一步檢查的建議。對于診斷已明確的疾病，要與以前骨髓涂片進(jìn)行比較，得出疾病完全緩解、部分緩解、改善、退步、復(fù)發(fā)等意見，見表。

(6)填寫報告日期并簽名。

5、標(biāo)本登記及保存

比如，以下是一個骨髓圖文報告范例

附：骨髓涂片的文字描述一般包括這幾項(xiàng)內(nèi)容：

①取材、涂片和染色情況；

②有核細(xì)胞增生情況、粒紅比值為多少；

③粒細(xì)胞系統(tǒng)的百分率、各階段比例與形態(tài)描述。

④紅細(xì)胞系統(tǒng)的的百分率、各階段比例與形態(tài)描述（包括成熟紅細(xì)胞）；

⑤巨核細(xì)胞的數(shù)目、各階段比例與形態(tài)描述，血小板的數(shù)目、分布情況；

⑥淋巴細(xì)胞系統(tǒng)的百分率，以哪一階段為主，形態(tài)描述。

⑦單核細(xì)胞系統(tǒng)的百分率，以哪一階段為主，形態(tài)描述。

⑧有無特殊特殊細(xì)胞、結(jié)構(gòu)，有無寄生蟲或微生物。

下圖：骨髓檢查診斷意見種類及特點(diǎn)

6、血涂片檢查的重要性

不同疾病其血象或骨髓象存在著不同或相同之處。因此，觀察血涂片對疾病診斷和鑒別診斷具有非常重要意義。兩者關(guān)系主要有以下五種情況：

（1）骨髓象相似而血象有區(qū)別：如溶血性貧血、缺鐵性貧血和急性失血的骨髓象相似，但血象有區(qū)別；神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓轉(zhuǎn)移時，骨髓中神經(jīng)母細(xì)胞呈彌散性增多，與急性粒細(xì)胞白血病相似，但前者血象中中性粒細(xì)胞增多伴左移，后者白細(xì)胞增多伴原始粒細(xì)胞及早幼粒細(xì)胞增多。

（2）骨髓象有區(qū)別而血象相似：如傳染性淋巴細(xì)胞增多癥和慢性淋巴細(xì)胞白血病(簡稱慢淋)的血象中皆有小淋巴細(xì)胞增多，但前者骨髓象中淋巴細(xì)胞稍增多，而慢淋骨髓中淋巴細(xì)胞卻明顯增多。

（3）骨髓象變化不顯著而血象有顯著異常  如傳染性單核細(xì)胞增多癥，其骨髓中的異型淋巴細(xì)胞少見，而血象中異型淋巴細(xì)胞常大于20％。

（4）骨髓象有顯著異常而血象變化不顯著 如多發(fā)性骨髓瘤、戈謝病、尼曼-匹克病，其骨髓中分別可見到特異性的骨髓瘤細(xì)胞、戈謝細(xì)胞、尼曼-匹克細(xì)胞，但血象中甚少見到。

（5）血象中細(xì)胞較骨髓中細(xì)胞成熟：血象中血細(xì)胞來源于骨髓，因此白血病時血象中的白血病細(xì)胞較骨髓中成熟、較易辨認(rèn)，故結(jié)合血象可輔助白血病細(xì)胞類型的判斷。

四、健康成人的正常骨髓象

五、骨髓象檢查的注意事項(xiàng)

不能抓住某一、二個特點(diǎn)就輕易地做出肯定或否定的判斷。應(yīng)全面觀察。

涂片制備、染色、觀察部位等不同，其顯微鏡下的細(xì)胞形態(tài)相差較大。 

介于上、下兩個階段間，歸入下一階段。 

兩個系統(tǒng)之間的細(xì)胞，如難以判斷，可采用大數(shù)歸類法（即歸入數(shù)量較多的系統(tǒng)）。

急性白血病 ，要結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色、血涂片細(xì)胞形態(tài)。 

歸入“分類不明”的細(xì)胞不宜過多。

涂片中血小板數(shù)減少的患者，要排除標(biāo)本凝固的可能性。

【第二部分】細(xì)胞化學(xué)染色

細(xì)胞化學(xué)染色（Cytochemical stain）是細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合而形成的一門科學(xué)。它以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用化學(xué)反應(yīng)的原理對細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)（包括酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。

【臨床應(yīng)用】：

①輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型。不同細(xì)胞系列，其所含的化學(xué)物質(zhì)成分、分布及含量各有不同；且隨著細(xì)胞的逐漸成熟，化學(xué)物質(zhì)的成分、含量等發(fā)生相應(yīng)的變化。根據(jù)細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果不同，可推斷細(xì)胞所屬系列。僅從細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察白血病的診斷正確率約50～70%，如結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色則可提到90%以上。 

②輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷。因?yàn)檠?xì)胞在病理情況下，其化學(xué)物質(zhì)成分及含量會發(fā)生改變，以輔助疾病的診斷，如中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色、鐵染色等。

【基本方法】

細(xì)胞化學(xué)染色因種類不同，染色步驟不同，但基本步驟為固定、有色沉淀反應(yīng)及復(fù)染。

1、固定：

為了保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)及化學(xué)成份的不變，需對細(xì)胞進(jìn)行固定。根據(jù)染色的成份不同，選擇合適的固定液，使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、酶類、糖類等變成不溶性物質(zhì)。固定的方法有物理法和化學(xué)法，臨床上常用的是化學(xué)法固定。

物理法包括干燥和火焰固定；化學(xué)法包括蒸汽固定和液體固定，如甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等。 

①蒸汽固定：甲醛是一種常用的固定劑，甲醛極易揮發(fā)、氧化，故常用40%甲醛進(jìn)行蒸汽固定。即在較封閉的玻璃器皿中加入40%甲醛，將涂片血膜朝下，固定5～10min。

②液體固定：將涂片浸在甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定液中，也可用兩種或兩種以上固定液混合而成，如10%甲醛甲醇液、甲醛丙酮緩沖液等。

2、有色沉淀反應(yīng)：

通過不同化學(xué)反應(yīng)，使被檢測的化學(xué)物質(zhì)最終形成穩(wěn)定的有色沉淀。列舉以下三種化學(xué)反應(yīng)：

①偶氮耦聯(lián)法：含萘酚的底物，在相應(yīng)酶的作用下釋放出萘酚，萘酚與重氮鹽結(jié)合，偶氮偶聯(lián)形成相應(yīng)顏色的沉淀物。如中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色、特異性酯酶染色、非特異性酯酶染色、酸性磷酸酶染色等。

②普魯士藍(lán)反應(yīng)：細(xì)胞內(nèi)、外的鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用，形成如亞鐵氰化鐵藍(lán)色沉淀，如鐵染色。

③雪夫反應(yīng)：過碘酸氧化細(xì)胞內(nèi)糖類中的乙二醇基形成乙二醛基，醛基與雪夫試劑作用，使無色品紅形成紅色沉淀物，如過碘酸-雪夫反應(yīng)。

3、復(fù)染：

目的在于使各種細(xì)胞能顯示出來便于觀察。選擇復(fù)染液的顏色應(yīng)與有色沉淀的顏色有明顯的對比度，即能使細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示又能清楚地看出細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果。如鐵染色復(fù)染常用中性紅，過碘酸-雪夫反應(yīng)常用甲基綠。對核著色效果較好的有中性紅、甲基綠、蘇木精、核固紅、沙黃等，使?jié){著色較好的有伊紅、剛果紅、光綠等。復(fù)染后，首先要通過顯微鏡觀察染色是否成功（如過氧化物酶染色、過碘酸-雪夫反應(yīng)等可觀察中性成熟粒細(xì)胞是否呈強(qiáng)陽性），然后觀察染色結(jié)果并報告結(jié)果，結(jié)果報告一般包括陽性率、陽性積分（也稱為陽性指數(shù)）或陽性分布情況。

一、鐵染色

【原理】 

健康人骨髓中的貯存鐵主要存在于骨髓小粒和幼紅細(xì)胞中。骨髓中的鐵在酸性環(huán)境下與亞鐵氰化鉀作用，形成普魯士藍(lán)色的亞鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位。鐵染色（ferric stain）化學(xué)反應(yīng)過程如下： 

【正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)】：骨髓中的貯存鐵分為細(xì)胞外鐵和細(xì)胞內(nèi)鐵。細(xì)胞外鐵主要存在于骨髓小粒的巨噬細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)鐵是指存在于中幼紅細(xì)胞、晚幼紅細(xì)胞及紅細(xì)胞中的鐵（包括鐵粒幼紅細(xì)胞、鐵粒紅細(xì)胞）。

1、細(xì)胞外鐵：觀察骨髓小粒中的鐵，陽性結(jié)果呈彌散性、顆粒狀、小珠狀或塊狀藍(lán)色。根據(jù)骨髓小粒中鐵的存在方式及量將細(xì)胞外鐵分為（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++）。

2、細(xì)胞內(nèi)鐵：觀察100個中幼紅細(xì)胞和晚幼紅細(xì)胞，計算出鐵粒幼紅細(xì)胞的百分比（即細(xì)胞內(nèi)鐵陽性率）。

鐵粒幼紅細(xì)胞是指胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞，根據(jù)藍(lán)色鐵顆粒多少、粗細(xì)分為：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞。

Ⅰ型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒1～2個。

Ⅱ型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒3～5個。

Ⅲ型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒6～10個。

Ⅳ型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒11個以上。

環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞：是指幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)色在5顆以上，圍繞核周三分之一以上者。

成熟紅細(xì)胞中出現(xiàn)鐵顆粒稱為鐵粒紅細(xì)胞。

【參考范圍】

1、細(xì)胞外鐵：（+）～（++），約2/3人為（++），約1/3人為（+）。

2、細(xì)胞內(nèi)鐵：鐵粒幼紅細(xì)胞陽性率在12%～44%。以Ⅰ型為主，少數(shù)為Ⅱ型。無環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞及鐵粒紅細(xì)胞。不同的實(shí)驗(yàn)室其細(xì)胞內(nèi)鐵的參考值相差較大，所以要建立自己實(shí)驗(yàn)室的參考值。

【臨床意義】

鐵染色是臨床應(yīng)用最廣泛的細(xì)胞化學(xué)染色之一，主要用于缺鐵性貧血和環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞增多性貧血的診斷和鑒別診斷。

1、缺鐵性貧血：其細(xì)胞外鐵陰性，細(xì)胞內(nèi)鐵陽性率明顯下降或?yàn)榱恪＝?jīng)鐵劑治療有效后，其細(xì)胞內(nèi)鐵、外鐵增多。因此鐵染色可作為診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的重要方法。

2、鐵粒幼細(xì)胞貧血：鐵粒幼紅細(xì)胞增多，其中的環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞增多，有時可見到鐵粒紅細(xì)胞，細(xì)胞外鐵也常明顯增多。因此鐵染色可作為診斷本病的重要方法。

3、骨髓增生異常綜合征（MDS）：伴環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞增多的難治性貧血，其環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞大于有核紅細(xì)胞15%，細(xì)胞外鐵也常增加。

4、非缺鐵性貧血：溶血性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、再生障礙性貧血、多次輸血后和白血病等，細(xì)胞外鐵和內(nèi)鐵正?；蛟黾樱桓腥?、肝硬化、慢性腎炎、尿毒癥、血色病等，細(xì)胞外鐵明顯增加而鐵粒幼紅細(xì)胞可減少。

【應(yīng)用評價】 

鐵染色是臨床上應(yīng)用最廣泛的一種細(xì)胞化學(xué)染色。鐵染色的結(jié)果一般情況下是可信的，雖然該指標(biāo)不如血漿鐵蛋白敏感，但不受多種病理因素影響，所以說鐵染色是反應(yīng)機(jī)體儲存鐵的金標(biāo)準(zhǔn)。

1、假陽性：骨髓涂片受試劑、玻片清潔度及操作過程等因素的影響，涂片易被外界的鐵污染，導(dǎo)致細(xì)胞外鐵、細(xì)胞內(nèi)鐵增加或使陰性患者呈“陽性”；

2、假陰性：臨床上導(dǎo)致細(xì)胞外鐵假陰性的原因較少，通常是由于將標(biāo)本凝塊誤認(rèn)為是骨髓小粒所致。

二、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）

【原理】

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色的方法有Gomori鈣-鈷法和Kaplow偶氮耦聯(lián)法。

Kaplow偶氮偶聯(lián)法：成熟中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶在pH9.6左右的堿性環(huán)境中，能水解基質(zhì)液中的磷酸萘酚鈉底物，釋放出萘酚，后者與重氮鹽耦聯(lián)，生成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)酶活性所在之處。不同的底物與重氮鹽的組合不同。

【正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)】

NAP主要存在于中性成熟粒細(xì)胞胞漿內(nèi)，故中性成熟粒細(xì)胞胞漿呈陽性，其他細(xì)胞基本呈陰性。在油鏡下計數(shù)100個成熟中性粒細(xì)胞，分別記錄其分級情況：（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++），分別為1、2、3、4分， 100個細(xì)胞中陽性細(xì)胞總數(shù)即為陽性率，100個細(xì)胞中陽性細(xì)胞的積分之和即為積分值。

例： 

4分 占20％ 4 x 20=80分。

3分 占40％ 3 x 40=120分。

2分 占18％ 2 x 18=36分。

1分 占10％ 1 x 10=10分。

0分 占12％ 0 x 12=0分。

則陽性率88％ 積分=246分 

【參考范圍】

陽性率﹤40%，NAP的積分值為30～130分。

【臨床意義】

不同疾病其NAP活性有變化。而且有些生理性因素可使酶活性發(fā)生改變，如應(yīng)激狀態(tài)、經(jīng)前期、妊娠期、新生兒等可使NAP活性增加。

1、NAP積分增加：見于細(xì)菌性感染（包括類白血病反應(yīng)）、再生障礙性貧血、某些骨髓增殖性疾病（如慢性中性粒細(xì)胞白血病、骨髓纖維化、真性紅細(xì)胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥）、慢性粒細(xì)胞白血病（加速期、急變期）、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、惡性淋巴瘤、骨髓轉(zhuǎn)移癌、腎上腺糖皮質(zhì)激素及雄激素治療后等。

2、NAP積分下降：慢性粒細(xì)胞白血病慢性期、急性粒細(xì)胞白血病、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、骨髓增生異常綜合征、惡性組織細(xì)胞病等。

記憶技巧：不影響粒細(xì)胞分化成熟的疾病，其NAP是不可能降低的

【應(yīng)用評價】  

1、類白與慢粒的鑒別：前者增高，后者降低。

2、PNH與再障鑒別：前者減低，后者增高。

3、急性白血病類型鑒別：急粒NAP積分值減低，急淋NAP積分值增高。

由于本試驗(yàn)結(jié)果受影響的因素較多，如試劑、生理性波動及每個試驗(yàn)人員判斷標(biāo)準(zhǔn)等，使結(jié)果相差較大，各單位應(yīng)建立本實(shí)驗(yàn)室參考范圍，NAP積分明顯增高或明顯下降，對疾病的診斷才具有重要的意義。

三、過氧化物酶染色（POX）

【原理】

血細(xì)胞所含的過氧化物酶（POX）主要為髓過氧化物酶（MPO），是人類中性粒細(xì)胞含量最多的一種蛋白質(zhì)。POX的染色方法有多種，如復(fù)方聯(lián)苯胺法、二氨基聯(lián)苯胺法（DAB） 、四甲基聯(lián)苯胺、改良的Pereira染色法等等。

二氨基聯(lián)苯胺法的原理為：血細(xì)胞內(nèi)的POX，能分解H2O2而釋放出新生氧，后者氧化二氨基聯(lián)苯胺，形成金黃色不溶性沉淀，定位于POX酶所在的活性部位。

【正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)】 

1、粒細(xì)胞系統(tǒng)：分化差的原始粒細(xì)胞為陰性，分化好的原始粒細(xì)胞至中性成熟粒細(xì)胞均呈陽性；且隨著細(xì)胞的成熟，陽性反應(yīng)的程度逐漸增強(qiáng)。嗜酸性粒細(xì)胞陽性最強(qiáng)，嗜堿性粒細(xì)胞陰性。

2、單核細(xì)胞系統(tǒng)：大多數(shù)細(xì)胞呈陰性或弱陽性，陽性顆粒少而細(xì)小。

3、其他細(xì)胞：淋巴細(xì)胞系統(tǒng)、紅細(xì)胞系統(tǒng)及巨核細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞均呈陰性，漿細(xì)胞、組織細(xì)胞也呈陰性，吞噬細(xì)胞有時呈陽性。

【臨床意義】

POX染色是輔助判斷急性白血病細(xì)胞類型的首選、最重要的細(xì)胞化學(xué)染色。

1、急性淋巴細(xì)胞白血?。涸剂馨图?xì)胞及幼稚淋巴細(xì)胞均呈陰性。但實(shí)際上急性淋巴細(xì)胞白血病患者骨髓中可殘留少許的原始粒細(xì)胞，而出現(xiàn)“原始淋巴細(xì)胞”呈陽性的現(xiàn)象，故FAB分型規(guī)定急性淋巴細(xì)胞白血病患者POX的陽性率＜3%。

2、急性粒細(xì)胞白血?。涸剂＜?xì)胞陽性或陰性，但常陽性，為（+）～（++），陽性顆粒一般較多，顆粒較粗大，局灶性分布。 

3、急性早幼粒細(xì)胞白血?。涸缬琢＜?xì)胞呈強(qiáng)陽性，為（+++）～（++++）。

4、急性單核細(xì)胞白血?。涸紗魏?、幼稚單核細(xì)胞多數(shù)呈陰性或弱陽性，其陽性顆粒少而細(xì)小，分布彌散。

5、急性粒單核細(xì)胞白血?。涸紗魏恕⒂字蓡魏思?xì)胞呈陰性或弱陽性，原始粒細(xì)胞呈陽性或陰性。

6、急性紅白血?。涸剂＜?xì)胞呈陽性或陰性，原始單核細(xì)胞呈陰性或弱陽性，有核紅細(xì)胞呈陰性。

7、中性成熟粒細(xì)胞POX活性下降，見于骨髓增生異常綜合征、放射病、退化的中性粒細(xì)胞及某些白血病等。

小編注：上圖取自@協(xié)和檢驗(yàn)_張時民 教授的新浪微博

【應(yīng)用評價】

POX染色是急性白血病形態(tài)學(xué)分型中最重要、首選的常規(guī)細(xì)胞化學(xué)染色。觀察POX染色的關(guān)鍵是如何辨認(rèn)哪種細(xì)胞是白血病細(xì)胞，由于POX染色片子中的細(xì)胞結(jié)構(gòu)不如瑞氏染色下清楚，而且陽性細(xì)胞中已有陽性顆粒的覆蓋，在一定程度上干擾了白血病細(xì)胞的辨認(rèn)，所以其POX陽性率高低與實(shí)際真值之間會有一定的誤差。同時，由于存在著雜質(zhì)的沉淀，會出現(xiàn)假陽性，此時往往其他細(xì)胞和背景上也有陽性顆粒；

試劑失效，可導(dǎo)致假陰性，如果片中中性成熟粒細(xì)胞呈強(qiáng)陽性，即可排除試劑失效。

由于POX染色測定MPO的敏感性明顯低于流式細(xì)胞術(shù)對MPO測定。所以， POX染色陰性的患者并不等于白血病細(xì)胞中不存在著此酶，需用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行確認(rèn)。

【補(bǔ)充】

蘇丹黑染色（SBB）的染色結(jié)果與臨床意義基本同POX染色 ，但其靈敏度及特異性兩者有所不同。SBB染色的特異性低于POX染色，POX陽性見于髓系細(xì)胞，而SBB陽性也可見于淋系細(xì)胞；但SBB染色的敏感性高于POX染色，例如急性粒細(xì)胞白血病POX染色陰性的患者，其SBB染色可陽性。

由于SBB與POX染色意義相似，臨床上通常只選擇其中一種。因?yàn)榧?xì)胞化學(xué)染色的特異性比敏感性重要，所以臨床上選用POX染色，如患者POX染色陰性者可再加做SB染色或直接采用細(xì)胞免疫分型來確認(rèn)。

四、過碘酸-雪夫反應(yīng)（PAS）

【原理】

過碘酸是氧化劑，使含有乙二醇基（-CHOH-CHOH）的多糖類物質(zhì)（糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白及糖酯等）氧化，形成雙醛基（-CHO-CHO）。醛基與雪夫試劑中的無色品紅結(jié)合，使無色的品紅變成紫紅色化合物，定位于含有多糖類的細(xì)胞內(nèi)。過碘酸-雪夫反應(yīng)（PAS）以前又稱為糖原染色。

【正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)】 

1、粒細(xì)胞系統(tǒng)：分化差的原始粒細(xì)胞陰性，分化好的原始粒細(xì)胞至中性分葉核粒細(xì)胞均呈陽性反應(yīng)，并隨著細(xì)胞的成熟而逐漸增強(qiáng)，陽性呈彌散性、細(xì)顆粒狀；嗜酸性粒細(xì)胞中的嗜酸性顆粒本身不著色，而顆粒之間的胞質(zhì)呈紅色；嗜堿性粒細(xì)胞中的嗜堿性顆粒呈陽性，而顆粒之間的胞質(zhì)不著色。

2、紅細(xì)胞系統(tǒng)：有核紅細(xì)胞及紅細(xì)胞均呈陰性。

3、單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差的原始單核細(xì)胞呈陰性，其他陽性，絕大多數(shù)陽性呈細(xì)顆粒狀，有時分布于細(xì)胞邊緣的陽性顆粒較粗大。

4、淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：大多數(shù)呈陰性，少數(shù)呈陽性（陽性率常小于20％），陽性呈粗顆粒狀或塊狀。

5、巨核細(xì)胞系統(tǒng)：巨核細(xì)胞和血小板呈陽性，陽性反應(yīng)的程度隨細(xì)胞的發(fā)育成熟而增強(qiáng)，成熟巨核細(xì)胞多呈強(qiáng)陽性，陽性反應(yīng)物質(zhì)呈顆粒狀或塊狀。

6、其他細(xì)胞：少數(shù)漿細(xì)胞陽性，巨噬細(xì)胞可陽性，兩者均呈細(xì)顆粒狀。

【臨床意義】

1、紅細(xì)胞系統(tǒng)疾?。杭t血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征中有核紅細(xì)胞可陽性（呈均勻紅色或塊狀），有時有核紅細(xì)胞陽性反應(yīng)強(qiáng)且陽性率高，甚至紅細(xì)胞也呈陽性。某些紅系良性疾病，如缺鐵性貧血、地中海貧血、巨幼細(xì)胞貧血、再生障礙性貧血、其他溶血性貧血中的有核紅細(xì)胞有時也可呈陽性；巨幼細(xì)胞貧血、再生障礙性貧血、其他溶血性貧血中的有核紅細(xì)胞常呈陰性，個別細(xì)胞可呈陽性但反應(yīng)弱。

2、白細(xì)胞系統(tǒng)疾病：主要用于輔助鑒別急性白血病的細(xì)胞類型，因?yàn)椴煌?xì)胞類型急性白血病其陽性反應(yīng)可不同。 

①急性巨核細(xì)胞白血病時部分巨核細(xì)胞陽性，呈粗顆粒狀、小塊狀或彌散分布；

②急性粒細(xì)胞白血病時部分原始粒細(xì)胞呈陽性，呈細(xì)顆粒狀或彌散分布；

③急性單核細(xì)胞白血病時原始單核及幼稚單核細(xì)胞可呈陽性，陽性呈細(xì)顆粒狀，有時胞質(zhì)邊緣處顆粒較粗大。

④急性淋巴細(xì)胞白血病時原始淋巴細(xì)胞及幼稚淋巴細(xì)胞的陽性率升高，呈粗顆粒狀或小塊狀陽性；

⑤慢性淋巴細(xì)胞白血病時淋巴細(xì)胞的陽性率增加，呈粗顆粒狀或小塊狀；

⑥惡性淋巴瘤時淋巴瘤細(xì)胞陽性率高、陽性增強(qiáng)，呈小塊狀或粗顆粒狀。

3、其他細(xì)胞：戈謝（Gaucher）細(xì)胞呈強(qiáng)陽性，尼曼-皮克（Niemanm-Pick）細(xì)胞胞質(zhì)空泡呈陰性，而空泡之間的胞質(zhì)呈陽性；Reed-Sternberg細(xì)胞陰性或弱陽性；骨髓轉(zhuǎn)移性腺癌呈強(qiáng)陽性。

【應(yīng)用評價】 

PAS染色在診斷惡性紅細(xì)胞系統(tǒng)疾病中最有價值（尤其是強(qiáng)陽性，意義更大），但有時也呈陰性，所以陰性不能排除惡性紅系疾病的可能性；而在大多數(shù)良性紅系疾病中常呈陰性，但少數(shù)患者也可出現(xiàn)陽性。

在急性白血病中，如果的PAS染色結(jié)果典型，可輔助細(xì)胞系列判斷，但是實(shí)際上PAS染色結(jié)果常不典型。PAS染色受試劑等影響，也可出現(xiàn)假陰性或假陽性。

五、酯酶染色

不同血細(xì)胞中所含酯酶的成分不同。根據(jù)酯酶特異性高低分為特異性酯酶（SE）和非特異性酯酶（NSE）。特異性酯酶就是指氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）染色；非特異性酯酶的種類有多種，根據(jù)pH值不同分為酸性、中性和堿性酯酶，包括了酸性非特異性酯酶（酸性α-醋酸萘酚酯酶）、堿性非特異性酯酶（α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE））和中性非特異性酯酶，后者包括α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE） 、醋酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DAE）等。目前顯示血細(xì)胞中酯酶的方法均采用偶氮耦聯(lián)法。

（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

【原理】

血細(xì)胞內(nèi)的氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）水解基質(zhì)液中的氯乙酸AS-D萘酚，產(chǎn)生AS-D萘酚，進(jìn)而與基質(zhì)液中的重氮鹽耦聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。本試驗(yàn)常用的重氮鹽為堅(jiān)牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。NAS-DCE幾乎僅出現(xiàn)在粒細(xì)胞、其特異性高，因此又稱為“粒細(xì)胞酯酶”。 

【正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)】

1、粒細(xì)胞系統(tǒng) ：分化差的原始粒細(xì)胞呈陰性，分化好的原始粒細(xì)胞呈陽性，自早幼粒細(xì)胞至成熟中性粒細(xì)胞均呈陽性，但酶活性并不隨著細(xì)胞的成熟而增強(qiáng)。嗜酸性粒細(xì)胞呈陰性或弱陽性，嗜堿性粒細(xì)胞呈陽性。

2、單核細(xì)胞系統(tǒng)：絕大多數(shù)為陰性，僅個別單核細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞呈弱陽性。

3、其他細(xì)胞：如淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、血小板等均呈陰性，肥大細(xì)胞陽性。

【臨床意義】

主要用于輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類型，是急性白血病的常規(guī)細(xì)胞化學(xué)染色。

①急性粒細(xì)胞白血病時原始粒細(xì)胞呈陽性或陰性，所以染色結(jié)果為陰性者不能排除急?？赡苄?；

②急性早幼粒細(xì)胞白血病時早幼粒細(xì)胞呈強(qiáng)陽性；

③急性單核細(xì)胞白血病時原始單核及幼稚單核細(xì)胞幾乎均呈陰性，個別細(xì)胞弱陽性；

④急性粒-單核細(xì)胞白血病時原始粒細(xì)胞及早幼粒細(xì)胞呈陽性，原始單核及幼稚單核細(xì)胞呈陰性；

⑤急性淋巴細(xì)胞白血病和急性巨核細(xì)胞白血病均呈陰性。

【方法評價】

NAS-DCE是粒細(xì)胞的特異性酯酶，它是急性白血病形態(tài)學(xué)分型時常規(guī)要做的細(xì)胞化學(xué)染色，尤其有助于POX陽性的急粒及急單的鑒別。

該實(shí)驗(yàn)敏感性較POX低，如有一定數(shù)量白血病細(xì)胞NAS-DCE染色呈陽性，可以肯定白血病細(xì)胞中有粒系成分；如果均陰性則不能排除有粒系成分的可能性。

觀察NAS-DCE染色的關(guān)鍵是辨認(rèn)白血病細(xì)胞，其陽性率高低與實(shí)際真值之間會有一定的誤差（片中細(xì)胞種類越多誤差就越大）

同時該試驗(yàn)存在著假陽性、假陰性的現(xiàn)象，假陽性主要是由于試劑質(zhì)量等原因?qū)е玛栃灶w粒出現(xiàn)在背景及陰性的細(xì)胞上，假陰性主要是試劑失效，導(dǎo)致所有細(xì)胞（包括中性成熟粒細(xì)胞）均陰性。所以觀察結(jié)果時，可通過相應(yīng)的方法排除這些因素的影響，NAS-DCE染色白血病細(xì)胞陽性對診斷粒系是可靠的。

（二）α- 醋酸萘酚酯酶染色

【原理】 

α- 醋酸萘酚酯酶（α-NAE）存在于單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中，是一種中性非特異性的酯酶。血細(xì)胞內(nèi)的α-NAE在pH中性條件下，水解基質(zhì)液中的α- 醋酸萘酚并釋放出α-萘酚，進(jìn)而與基質(zhì)液中的重氮鹽耦聯(lián)形成不溶性有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。本試驗(yàn)常用的重氮鹽為堅(jiān)牢藍(lán)B，形成的有色沉淀為棕黑色或灰黑色。單核細(xì)胞系統(tǒng)的陽性可被氟化鈉抑制，所以做α-NAE染色時，通常同時做氟化鈉抑制試驗(yàn)。

【正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)】

1、單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差的原始單核細(xì)胞呈陰性，分化好的原始單核細(xì)胞呈陽性（常較強(qiáng)），幼稚單核及單核細(xì)胞也呈陽性，陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。所謂抑制是指氟化鈉試驗(yàn)的抑制率大于50% 。

2、粒細(xì)胞系統(tǒng)：陰性或陽性，但陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。

3、淋巴細(xì)胞系統(tǒng) 多數(shù)陰性，少數(shù)弱陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。

4、其他細(xì)胞：巨核細(xì)胞和血小板呈陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制；少數(shù)有核紅細(xì)胞呈弱陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制；漿細(xì)胞呈陰性。

【臨床意義】主要用于輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類型。

①急性單核細(xì)胞白血病中的細(xì)胞大多數(shù)呈陽性且較強(qiáng)，陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制；

②急性粒細(xì)胞白血病中的原始粒細(xì)胞呈陰性或陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制；

③急性早幼粒細(xì)胞白血病中的早幼粒細(xì)胞呈強(qiáng)陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制；

④急性淋巴細(xì)胞白血病中的原始淋巴細(xì)胞及幼稚淋巴細(xì)胞呈陰性或陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。

⑤急性粒-單核細(xì)胞白血病中的原始粒細(xì)胞呈陰性至陽性，陽性反應(yīng)不被氟化鈉抑制；原始單核及幼稚單核細(xì)胞呈陽性且較強(qiáng)，陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。

【評價應(yīng)用】

α-NAE染色是急性白血病形態(tài)學(xué)分型時常規(guī)要做的細(xì)胞化學(xué)染色。對單核細(xì)胞白血病與粒細(xì)胞白血病鑒別意義較大。一般來說α-NAE在急性單核細(xì)胞白血病的陽性較強(qiáng)，但M3或M2b也呈強(qiáng)陽性。

本試驗(yàn)存在假陽性、假陰性的現(xiàn)象。假陽性主要是由于試劑質(zhì)量等原因?qū)е玛栃灶w粒出現(xiàn)在背景及陰性的細(xì)胞上，并可導(dǎo)致氟化鈉被抑制的假象；假陰性主要是試劑失效，導(dǎo)致所有細(xì)胞（包括中性成熟粒細(xì)胞）均陰性。抑制率的計算應(yīng)以陽性指數(shù)來計算比較合理。由于實(shí)驗(yàn)影響因素較多，應(yīng)區(qū)別對待α-NAE染色。一般來說如果陽性較強(qiáng)且被氟化鈉明顯抑制，可以肯定其臨床意義；對于抑制不明顯的標(biāo)本，結(jié)果的判斷容易受主觀等因素的影響，只能作為參考指標(biāo)。

【補(bǔ)充】

1、醋酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DAE）染色與α-NAE染色屬于同一類細(xì)胞化學(xué)染色，這兩者的染色反應(yīng)、臨床意義和應(yīng)用評價基本相同，臨床上通常選擇其中一種。

2、α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色的臨床意義與α-NAE染色的臨床意義、方法學(xué)評價基本相同。α-NBE敏感性不如NAS-DAE，而特異性較NAS-DAE高，所以α-NBE染色也是急性白血病常用的細(xì)胞化學(xué)染色。α-NBE染色也存在著假陰性和假陽性。

（三）酯酶雙染色

在同一張涂片上進(jìn)行兩種酯酶染色的方法稱為酯酶雙染色。一般采用一種特異性酯酶加一種非特異性酯酶染色，故常用的有α-醋酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色、α-丁酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色等。

反應(yīng)的原理基本上同各自的染色原理，但同一張涂片上的血細(xì)胞要分別在兩種不同的基質(zhì)液中作用一定時間，最后復(fù)染、顯微鏡觀察。酯酶雙染色對診斷急性粒-單核細(xì)胞白血病的診斷具有獨(dú)特的價值，即在同一張片中出現(xiàn)兩種酯酶染色陽性的細(xì)胞或同一種細(xì)胞同時出現(xiàn)兩種酯酶染色陽性結(jié)果。

六、酸性磷酸酶染色（ACP）

【原理】

酸性磷酸酶（ACP）存在于細(xì)胞的溶酶體顆粒中，有些細(xì)胞中的酸性磷酸酶耐酒石酸，故抗酒石酸酸性磷酸酶染色有助于某些疾病的診斷及鑒別診斷。染色方法有偶氮耦聯(lián)法和Gomori硫化鉛法，前者常用。

偶氮耦聯(lián)法：血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性（pH5.0）條件下水解基質(zhì)液中的磷酸萘酚AS-BI，釋放出萘酚AS-BI，后者與基質(zhì)液中的重氮鹽耦聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。本試驗(yàn)常用的重氮鹽為六偶氮付品紅，形成紅色的沉淀。

【正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)】

所有血細(xì)胞的酸性磷酸酶染色均為陽性，但是單核細(xì)胞、組織細(xì)胞、巨核細(xì)胞和毛細(xì)胞反應(yīng)較強(qiáng)。

【臨床意義】 主要用于下列疾病的輔助診斷和鑒別。

1、多毛細(xì)胞白血病 多毛細(xì)胞呈陽性（常呈強(qiáng)陽性），陽性反應(yīng)不被L-酒石酸抑制。慢性淋巴細(xì)胞白血病的淋巴細(xì)胞和惡性淋巴瘤細(xì)胞ACP染色也可呈陽性，但可被L-酒石酸抑制。但ACP陰性者，并不能排除多毛細(xì)胞白血病的可能性 。

2、鑒別戈謝細(xì)胞和尼曼-匹克細(xì)胞 前者陽性，后者陰性。

3、T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞 前者陽性，后者陰性或弱陽性。

【應(yīng)用評價】   

由于ACP染色在多毛細(xì)胞白血病中最具有特征性，所以主要用于多毛細(xì)胞白血病的診斷，其次是在戈謝病和尼曼-匹克病應(yīng)用。這些疾病在臨床上均很少見，故常因?yàn)闃?biāo)本很少而導(dǎo)致試劑過期，因此臨床上往往不能及時開展此項(xiàng)檢查。該染色也存在著假陰性、假陽性現(xiàn)象。

七、小結(jié)

急性白血病分為急性淋巴細(xì)胞白血?。ê喎Q急淋，ALL）和急性髓細(xì)胞白血?。ò∕0、M1、M2a、M2b、M3、M4、M5、M6、M7）。由于急性白血病骨髓中是以原始和/或幼稚細(xì)胞增生為主，僅僅根據(jù)瑞氏染色下的細(xì)胞形態(tài)，容易做出錯誤的判斷，因此不論急性白血病細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)是否典型，均應(yīng)做細(xì)胞化學(xué)染色。建議急性白血病應(yīng)至少做：過氧化物酶染色、特異性酯酶染色、非特異性酯酶染色及過碘酸-雪夫反應(yīng)。

1995年發(fā)布的文獻(xiàn)《急性白血病分型推薦流程》中，國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)推薦以最少細(xì)胞化學(xué)染色組合(包括MPO、CE、a-NAE三種染色)為急性白血病實(shí)驗(yàn)診斷的首選細(xì)胞化學(xué)染色項(xiàng)目，如下圖：

2008年發(fā)布的文獻(xiàn)《國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ICSH）關(guān)于骨髓標(biāo)本與報告標(biāo)準(zhǔn)化指南》中提到：如懷疑急性白血病，建議髓過氧化物酶染色和非特異性酯酶染色（如α-萘丁酸酯酶）。當(dāng)無流式細(xì)胞學(xué)檢查或流式結(jié)論不確定時，細(xì)胞化學(xué)染色特別有價值，如下圖：

由于白血病細(xì)胞具有高度異質(zhì)性，同一類型白血病在不同患者中，其細(xì)胞化學(xué)成分也不盡相同，經(jīng)常會出現(xiàn)細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果不典型、摸棱兩可或結(jié)果與形態(tài)結(jié)果不相符的現(xiàn)象，所以根據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色并不能對所有急性白血病的細(xì)胞類型做出正確的判斷，還需要結(jié)合染色體檢查、細(xì)胞免疫學(xué)檢查及分子生物學(xué)檢查等進(jìn)行全面分析。

對于不明原因貧血的初診患者，應(yīng)當(dāng)將鐵染色作為常規(guī)檢查項(xiàng)目，因?yàn)槿辫F是導(dǎo)致貧血最常見的病因，同時還可以了解是否有鐵代謝的異常。必要時還應(yīng)做中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色和過碘酸－雪夫反應(yīng)，用于貧血輔助診斷和鑒別診斷。

下圖來自“臨床血液學(xué)檢驗(yàn)微平臺”，推薦大家關(guān)注：

【第三部分】概括

骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查是診斷血液系統(tǒng)疾病最重要的實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目，通過檢查得出不同性質(zhì)的診斷意見。骨髓檢查的常規(guī)步驟為：骨髓取材→常規(guī)染色→低倍鏡觀察→油鏡觀察→計算結(jié)果→填寫報告單→標(biāo)本登記及保存。

細(xì)胞化學(xué)染色是以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，對血細(xì)胞內(nèi)的某些化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行分析的一種方法，細(xì)胞化學(xué)染色種類有許多，但其基本步驟為：固定→有色沉淀反應(yīng)→復(fù)染。不同染色起著不同的作用，其中鐵染色、NAP染色等有助于疾病的診斷，POX染色、特異性酯酶染色及非特異性酯酶染色等有助于判斷急性白血病的細(xì)胞類型。