1、點(diǎn)樣是成功分離的關(guān)鍵,怎樣提高點(diǎn)樣效率?
(1)點(diǎn)樣圓點(diǎn)小而圓,直徑盡量不要超過(guò)2mm; (2)在便于顯色的前提下,點(diǎn)樣量盡量少,同時(shí)就要注意點(diǎn)樣液體的濃度,防止過(guò)載拖尾; (3)點(diǎn)樣勿上薄層表面; (4)點(diǎn)樣圓點(diǎn)盡量遠(yuǎn)離薄層邊緣,至少相隔3mm,減少邊緣效應(yīng); (5)所有點(diǎn)樣點(diǎn)盡量保持在一條與底邊平行的直線上,務(wù)必點(diǎn)交叉點(diǎn); (6)點(diǎn)樣完成后,溶劑用吹風(fēng)機(jī)盡量吹干。
2、兩個(gè)點(diǎn)離的太近怎么辦? (1)在展開(kāi)劑中多次展多次; (2)增加展開(kāi)劑的極性; (3)選擇不同體系的展開(kāi)劑展開(kāi)。
3、TLC顯示一個(gè)點(diǎn),是代表只有一個(gè)化合物嗎? TLC點(diǎn)板顯示一個(gè)點(diǎn),有可能是只有一個(gè)化合物,但也有特殊情況,一個(gè)點(diǎn)里面包含大于1個(gè)的化合物,這種情況我們可以選擇不同混合體系的展開(kāi)劑看是否能分開(kāi),同時(shí)結(jié)合LCMS和核磁判斷。 4、板展開(kāi)后,溶劑前沿的點(diǎn)是一個(gè)點(diǎn)嗎?原點(diǎn)上的點(diǎn)是一個(gè)點(diǎn)嗎? 前沿和原點(diǎn)的都不能確定是幾個(gè)點(diǎn),要靠變換展開(kāi)劑的極性,讓這些點(diǎn)爬到Rf=0.3-0.5左右來(lái)確定到底是幾個(gè)點(diǎn)。 5、TLC爬板為什么有時(shí)會(huì)爬歪? (1)可能是板子沒(méi)有放平; (2)可能是板子一邊貼到展缸壁,造成了虹吸現(xiàn)象,一邊爬的快,一邊慢,擴(kuò)散后就變歪了。 6、如果化合物有酸堿基團(tuán)我們需要如何處理? 若樣品酸性比較大,一般在展開(kāi)劑中加酸(0.1%-0.5%甲酸,乙酸); 若樣品堿性比較大,一般在展開(kāi)劑中加堿(0.1%-0.5%氨水,三乙胺)。 7、TLC為什么會(huì)拖尾?拖尾現(xiàn)象如何處理? (1)樣品溶度過(guò)大,TLC板過(guò)載,這種情況通過(guò)降低樣品溶度或者上樣量驗(yàn)證; (2)樣品未完全溶解,TLC板上有未溶的固體樣品,點(diǎn)板一定要是溶液形式; (3)TLC板吸潮,放烘箱110oC活化30分鐘即可; (4)樣品為強(qiáng)極性物質(zhì),含有氨基或者羧基等極性官能團(tuán),可以在展開(kāi)劑中加入酸或者堿;(5)硅膠板在出廠是不合格,聯(lián)系售后,及時(shí)退換貨。 8、點(diǎn)板時(shí),基點(diǎn)總有黑點(diǎn)的原因? (1)產(chǎn)物或者副產(chǎn)物極性太大,如鹽類(lèi),這種情況,可以調(diào)pH后再點(diǎn)板; (2)可以將化合物預(yù)處理下,除去那些不溶性的無(wú)機(jī)物,這樣可能會(huì)不一樣,點(diǎn)板會(huì)變得清晰。
9、有強(qiáng)酸或者強(qiáng)堿的反應(yīng)體系TLC跟蹤反應(yīng)需注意那些方面? TLC跟蹤強(qiáng)酸或強(qiáng)堿反應(yīng)體系,最好先中和樣品的酸堿性再點(diǎn)板。一般強(qiáng)酸堿的產(chǎn)物極性比較大,注意選擇合適的展開(kāi)劑。 10、水體系,TLC如何跟蹤反應(yīng)? (1)待檢測(cè)化合物在不溶于水的有機(jī)溶劑溶解度大于水,可以用有機(jī)溶劑萃取,點(diǎn)有機(jī)相;(2)直接點(diǎn)樣,吹干后再展開(kāi)。 11、反應(yīng)有固體或者兩相反應(yīng)時(shí),TLC跟蹤反應(yīng)如何處理? (1)反應(yīng)中有固體需要找合適的溶劑將固體溶解,體系澄清后點(diǎn)板; (2)選擇一種溶劑既溶于水又溶于有機(jī)溶劑,兩相消失再點(diǎn)板,常用溶劑是甲醇。 12、用10%硫酸/乙醇溶液顯色,烤板為什么變糊?如何處理? 薄層板的粘合劑是羧甲基纖維素鈉,當(dāng)烘烤溫度超過(guò)100度,濃硫酸就會(huì)把羧甲基纖維素鈉碳化,變黑,所以我們?cè)谟糜袧饬蛩岬娘@色劑時(shí),烤板顯色的要注意烤板溫度,實(shí)際應(yīng)用中用電吹風(fēng)就能顯色,也要控制時(shí)間,時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)。 13、如何提高PTLC展開(kāi)效率? (1)溶解樣品的溶劑極性要小,溶解性好; (2)上樣的色帶要齊且不能太寬; (3)展開(kāi)之前要將溶劑吹干; (4)所有展開(kāi)劑極性較小板時(shí)略大。 14、如何確認(rèn)PTLC上樣量? 以20cm*20cm*1mm規(guī)格為例:若上樣帶寬是0.5cm,板兩邊空出0.5cm邊際,其中1mm厚的硅膠板負(fù)載量不要超過(guò)5mg/cm3,上樣量約為0.5*19*5=47.5mg,以此類(lèi)推。 15、PTLC如何確認(rèn)疑似色帶? (1)在制備板上點(diǎn)小樣對(duì)照點(diǎn),展開(kāi)后對(duì)比小樣,作為輔助判斷; (2)展開(kāi)后刮取少量硅膠與對(duì)照點(diǎn)展小板判斷。 16、樣品在紫外沒(méi)有吸收,如何通過(guò)PTLC進(jìn)行分離? 樣品展開(kāi)完成后,用玻璃刀劃取一小整塊,用顯色劑顯色,找出目標(biāo)樣品,對(duì)照制備板,勾出相應(yīng)的位置,刮板、洗脫、過(guò)濾、旋干即可。 17、PTLC過(guò)程中如何減少產(chǎn)品損失? 制備板的上樣量40-60mg,產(chǎn)品吸附在硅膠上,分離后將硅膠刮出,產(chǎn)品用洗脫劑從硅膠上洗脫出來(lái),為了減少產(chǎn)品的損失, 需要注意的是: (1)將硅膠碾壓成細(xì)粉末,增加在溶劑中的接觸面積; (2)常用的洗脫劑體系是二氯甲烷/甲醇,比例不要超過(guò)10/1,否則硅膠上的一些物質(zhì)會(huì)溶于其中; (3)硅膠在溶劑中充分?jǐn)嚢瑁?,過(guò)濾后,濾餅再用洗脫劑多洗滌幾次,這樣損失就會(huì)很少了。 18、如何利用TLC摸索最佳柱層析條件? TLC的一個(gè)重要作用就是為柱層析選擇合適的洗脫體系和合適的洗脫比例,柱層析洗脫劑配制后用TLC驗(yàn)證Rf值,將需要的斑點(diǎn)Rf值調(diào)至0.2左右,梯度洗脫。
19、TLC為何與LCMS、MS、1H-NMR結(jié)合應(yīng)用? (1)TLC-LCMS聯(lián)用,可以確認(rèn)純度; (2)TLC-Ms聯(lián)用,一般情況下,可以確認(rèn)目標(biāo)產(chǎn)物,適用于得到標(biāo)樣點(diǎn); (3)TLC-NMR聯(lián)用,可以確認(rèn)點(diǎn)的結(jié)構(gòu)。 20、如何減少TLC的邊緣效應(yīng)? 增加層板缸中溶劑蒸氣濃度,在層板缸內(nèi)壁貼上浸濕展開(kāi)劑的濾紙或選擇內(nèi)徑和長(zhǎng)度適宜的層析缸進(jìn)行層析;選擇適宜的單一溶劑代替混合溶劑;采用共沸溶劑代替一般混合溶劑。
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