腺病毒包裝系統(tǒng)按照重組方式主要分為兩種，一種在細(xì)菌（BJ5183）中重組，為AdEasy^TM腺病毒重組系統(tǒng)，另外一種在QBI-293A細(xì)胞中重組，為AdMax腺病毒重組系統(tǒng)。

一、 AdEasyTM腺病毒重組系統(tǒng)

AdEasyTM腺病毒重組系統(tǒng)1998年由He Tong Chuan等改造的一種非常簡單易用的雙質(zhì)粒系統(tǒng)，腺病毒基因組質(zhì)粒pAdEasy-1和轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pShuttle-CMV，pAdEasy-1質(zhì)粒是Ad5腺病毒基因組，其中刪除了E1基因（1-3533bp）和E3基因（28130-30830bp），

E1基因的功能區(qū)在293A細(xì)胞中得到補充；pShuttle-CMV質(zhì)粒包含目的基因插入位點、Ad5基因組左右同源臂、Ad5末端重復(fù)序列（ITR）、包裝信號序列、PacI雙酶切位點和卡那霉素抗性。

第一步：將目的基因cDNA插入轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pShuttle-CMV；

第二步：將得到的質(zhì)粒用PmeI或ECORI內(nèi)切酶線性化；

第三步：pShuttle-CMV和pAdEasy-1共同轉(zhuǎn)化大腸桿菌BJ5183，雙質(zhì)粒在BJ5183中發(fā)生重組，卡那霉素篩選重組子，并酶切鑒定。因為BJ5183有recA重組酶活性但同時又缺失介導(dǎo)細(xì)菌本身基因組重組的酶，可以用于質(zhì)粒重組和轉(zhuǎn)化，得到候選重組子；

第四步：將酶切鑒定正確的重組子轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)，在DH5a中擴大培養(yǎng)，質(zhì)粒提取，鑒定，PacI酶切線性化，暴露其反向末端重復(fù)序列（ITR）。

第五步：線性化質(zhì)?；厥蘸筠D(zhuǎn)染293A細(xì)胞，產(chǎn)生重組病毒顆粒，收毒，后續(xù)純化濃縮。

另外，也可以采用單質(zhì)粒兩步法重組，即將AdEasy轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞BJ5183中，再將pADEasy-BJ5183制備成感受態(tài)細(xì)胞，將構(gòu)建好的穿梭質(zhì)粒pShuttle-CMV用PmeI線性化后直接轉(zhuǎn)化pADEasy-BJ5183感受態(tài)細(xì)胞，卡那霉素篩選重組子，并酶切鑒定，線性化后轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞。