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細(xì)胞外囊泡 (extracellular visicles，EV) 是由細(xì)胞釋放出的攜帶并保護(hù)細(xì)胞來源生物信息分子物質(zhì)的特殊結(jié)構(gòu)，可通過轉(zhuǎn)運核酸和蛋白質(zhì)等生物信息物質(zhì)參與體內(nèi)靶細(xì)胞的信號調(diào)節(jié)，并作為藥物或疫苗的載體在抗腫瘤治療、干細(xì)胞治療等領(lǐng)域發(fā)揮關(guān)鍵作用，而其中EV中的RNA分子 (exoRNA) 因其獨特的表達(dá)模式而受到了最為廣泛的關(guān)注。 一、外泌體及miRNA純化 
① 外泌體純化
沉淀法miRCURY?外泌體純化試劑盒 暢銷
※ 從不同起始材料中進(jìn)行外泌體提?。耗蛞簶颖?-10 mL，CSF樣本1 mL，細(xì)胞培養(yǎng)液 1-10 mL ；血漿/血清0.2-1.4mL
※ 2小時內(nèi)完成外泌體提取
※ 無需高速離心及酚/氯仿提取
※ 適用于多種應(yīng)用，如miRNA或RNA profiling 訂購信息 | 產(chǎn)品 | 說明 | 貨號 | | miRCURY Exosome Serum/Plasma Kit | 沉淀法，從血清或血漿中提取外泌體及其他胞外囊泡 | 76743 |
親和柱膜法外泌體分離及外泌體內(nèi)RNA(含miRNA)的純化
exoEasy Maxi Kit 貨號：76064
從血漿、血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清及其他生物液體中分離完整的exosome及其他細(xì)胞外囊泡 ※ 適用于囊泡功能性檢測及物理和生化分析
※ 可在25分鐘內(nèi)純化獲得exosome及其他細(xì)胞外囊泡
※ 離心柱純化流程，可平行處理多個樣品
※ 可處理大體積的樣品(4 ml血漿或血清，或32ml細(xì)胞培養(yǎng)上清)，靈敏檢測低豐度轉(zhuǎn)錄本 exoRNeasy Serum/Plasma Kit 暢銷
采用親和性膜離心柱，可從來自血清、血漿、尿液、細(xì)胞上清等樣本中分離exosome和其他細(xì)胞外微泡中高效分離RNA。該試劑盒能夠快速、便利的獲得結(jié)果，十分適用于敏感的下游應(yīng)用。 訂購信息 | 產(chǎn)品 | 說明 | 貨號 | | exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50) | 過柱法，直接從樣本里面得到外泌體里面的RNA，4ml上樣量 | 77144 | | exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20) | 過柱法，直接從樣本里面得到外泌體里面的RNA, 10個4ml+10個1ml上樣的柱子 | 76064 |
特殊樣本外泌體及miRNA純化試劑盒訂購指南 | 提取方法 | 適用樣本 | 上樣量 | 貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 說明 |
| | 膜親和法 | 血漿、血清、腦脊液 | 1-4ml | 76214 | Buffer XE (45 ml) | 45ml | 洗脫囊泡的buffer |
| | 細(xì)胞培養(yǎng)上清 | 8ml | 77164-Qiagen | exoRNeasy Maxi Kit (50) | 50T | 提取外泌體以及外泌體中的總RNA | | 樣本量大于8ml | 76214 | Buffer XE (45 ml) | 45ml | 洗脫囊泡的buffer |
| | 尿液 | 4ml | 77164-Qiagen | exoRNeasy Maxi Kit (50) | 50T | 提取外泌體以及外泌體中的總RNA | | / | 74204 | RNeasy MinElute Cleanup Kit (50) | 50T | 用于尿液樣本中short RNA的提取的柱子 |
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② miRNA純化：Copurifcation of miRNA and total RNA
產(chǎn)品特點：
※ 可以單獨富集各種組織、細(xì)胞樣品中的miRNA和其他小RNAs (＞18nt)，做芯片分析時單獨分離可能會有幫助
※ 推薦同步純化包含miRNA的總RNA，這樣有助于一次cDNA合成可以獲得所有類型RNA信息，便于同時進(jìn)行miRNA，mRNA或其他非編碼RNA檢測
※ 硅膠膜技術(shù)確保獲得最好純度miRNA，不會有Trizol方法帶來的選擇性miRNA丟失，適合各種下游檢測 
miRNeasy Serum/Plasma Kit (貨號：217184)
※ 同樣使用經(jīng)典的硅膠膜法
※ 該試劑盒適用于使用檸檬酸鹽或EDTA抗凝的血清 (不能使用肝素，會干擾下游的實驗)
※ 保證清洗緩沖液的溫度在20-30°C，否則會有鹽類的殘留
※ 配合使用Spick-in control，對純化效率及下游檢測進(jìn)行監(jiān)測 | miRNeasy Serum/Plasma Kit | | RNA片段選擇 | 大于18nt | | 起始樣本量 | 200ul | | 最小洗脫體積 | 10ul | | RNA產(chǎn)量 | 60-150ng | | 內(nèi)參 | C.elegans miR-39 |
miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit (貨號：217204) 暢銷
※ 無需苯酚裂解，更易于在QIAcube進(jìn)行自動化操作
※ 采用UCP MinElute純化柱，更安全、更小洗脫體積
※ 純化高品質(zhì)含胞外/外泌體非編碼RNA(miRNA)的總RNA，適合任何下游應(yīng)用 miRNA純化試劑盒訂購指南 | 樣本類型 | 試劑盒名稱 | 試劑盒貨號 | 樣品量 | 洗脫體積 | 處理 | 純化類型 | 應(yīng)用 |
| | 動物組織或細(xì)胞 | miRNeasy Mini Kit | 217084 | 5mg（脂肪10mg）組織，
1 x 10 6細(xì)胞 | 10ul |
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| | miRNeasy 96 Kit | abs60261 | 10-20mg的組織 | 30ul | 手動 | miRNA | PCR, qPCR, real-time RT-PCR,
microarray |
| | 細(xì)胞miRNA提取試劑盒 | 217604 | 最多30 mg冷凍組織（15 mg穩(wěn)定組織），
最多1 x 107的細(xì)胞 | 30 μl | 手動（監(jiān)控），自動（QIAcube連接） | miRNA, total RNA | NGS, real-time RT-PCR, microarray |
| | miRNeasy Tissue/Cells Advanced Micro kit | 80224 | 組織：不超過30 mg的新鮮或冷凍組織；細(xì)胞：不超過1 x 107細(xì)胞 | / | / | DNA、RNA、miRNA | / | | 血液樣本 | 血液miRNA提取試劑盒 | abs60263 | 200μL外泌體樣本 | 40 μl | 手動 | Total RNA，miRNA, | PCR, qPCR, real-time RT-PCR,
microarray | | FFPE組織切片 | miRNeasy FFPE Kit | 76544 | 100 μl or 500 μl animal blood | 14 μl | 手動（離心） | Total RNA | Northern、雜交、RT-PCR、定量、實時RT-PCR、下一代測序、陣列分析 | | PAXgene Tissue Container 中的組織 | PAXgene Tissue miRNA Kit | 763134 | 2.5 ml | 40 μl | 手動（離心）或在QIAcube上 | miRNA | RT-PCR和實時RT-PCR、cDNA合成、northern、dot和slot blot分析、引物延伸、微陣列分析 | | 血清、血漿、尿液等無細(xì)胞體液 | miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit | abs60264 | ≤ 200ul | 30ul | 手動（離心） | RT-PCR和實時RT-PCR、cDNA合成、northern、dot和slot blot分析、引物延伸、微陣列分析 |
| | miRNeasy Serum/Plasma Kit | 217004 | 50mg（脂肪100mg）組織，1 x 107細(xì)胞 | 30 μl | 手動（離心或真空） | miRNA, total RNA | PCR, qPCR, real-time RT-PCR,
microarray |
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二、miRNA定量 ① miRCURY LNA miRNA qPCR檢測系統(tǒng) Exiqon microRNA qPCR系統(tǒng)將通用逆轉(zhuǎn)錄的高靈敏度，高效率與鎖核酸修飾的定量引物的高特異性相結(jié)合，在3個小時之內(nèi)即可完成microRNA表達(dá)分析。miRCURY LNA miRNA qPCR系統(tǒng)可提供assays及panels規(guī)格，20ng total RNA無需預(yù)擴增即可在96孔及384孔板上進(jìn)行上百microRNAs的精準(zhǔn)定量。miRCURY LNA miRNA qPCR檢測系統(tǒng)具有以下特點：
● 極高的靈敏度：低至1pg total RNA即可進(jìn)行可靠的定量
● 極高的特異性：LNA引物可精確區(qū)分只有一個堿基差異的miRNA異構(gòu)體
● 實驗操作簡單方便：在3小時內(nèi)即可完成從樣本到數(shù)據(jù)分析的整個流程 miRCURY LNA RT kit （貨號：339340）
用于一鏈合成，與miRCURY LNA miRNA PCR Assays / Panels搭配使用效果最佳，包含RNA spike-in模板。 miRCURY LNA miRNA PCR Assay / Custom PCR Assay / miRCURY LNA miRNA PCR Panels
200次反應(yīng)的預(yù)制或定制LNA miRNA PCR primers，用于目標(biāo)miRNA表達(dá)水平檢測。 miRCURY LNA SYBR Green PCR Kits（貨號：339345、339346、339347）
用于qPCR檢測，包含ROX染料。 miRCURY LNA miRNA PCR Starter Kit（貨號：339320） 爆品
包含該套件包括UniSp6模板及引物，一個候選內(nèi)源對照引物組（miR-103a-3p）和兩個經(jīng)過驗證的引物組（人、大鼠、小鼠），并通過LNA技術(shù)進(jìn)行了增強。這些試劑能夠定量分析多達(dá)20個樣品。 訂購信息 | 產(chǎn)品 | 說明 | 貨號 |
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| miRCURY LNA SYBR Green PCR Kit
| 2X miRCURY SYBR Green Master Mix, RNase-Free Water
| 339345 |
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| | 339346 |
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| | RNA Spike-In Kit, ForRT | 包含 UniSp2、UniSp4、和 UniSp5 RNA 內(nèi)參模板混合物及 cel-miR-39-3p RNA內(nèi)參模板 | 339340 |
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| | miRCURY LNA miRNA PCR Assay | 200 次反應(yīng)的 LNA miRNA PCR primers | 339317 |
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| | miRCURY LNA miRNA PCR Starter Kit | 2個可選的miRCURY LNA PCR Assay，spike-in templete & assay ，內(nèi)參 assay及20次逆轉(zhuǎn)錄，100次PCR所用的試劑 | 339350 |
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| | miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays | 200 次反應(yīng)的定制探針法 LNA miRNA PCR primers | abs60265 | miRNA加尾法逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 | 20T40T | miRNA加尾逆轉(zhuǎn)錄試劑，可配套 miRNA加尾染料法熒光定量PCR試劑使用 | | abs60267 | miRNA探針法逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 | 20T40T | miRNA探針法逆轉(zhuǎn)錄試劑；加尾的，miRNA探針法熒光定量PCR試劑配套使用 |
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| | abs60269 | miRNA莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 | 25T50T | 莖環(huán)法miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑；與miRNA莖環(huán)染料法熒光定量PCR試劑盒配套使用 |
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| | abs60271 | miRNA加尾染料法熒光定量PCR試劑盒 | 200T300T400T | SYBR Green染料法定量試劑，搭配的逆轉(zhuǎn)錄是加尾法的 |
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| | 339325 |
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| | miRCURY LNA miRNA QC PCR Panel | 質(zhì)控板，適用于樣本質(zhì)量差，正式panel前的質(zhì)檢 | 339330 |
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四、microRNA功能研究工具 ① miRNA Mimic
miRNA mimic被設(shè)計用來模擬自然發(fā)生的、成熟的miRNA。將miRNA模擬物引入細(xì)胞將增加含有該特定miRNA的RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RISC)的比例。通過研究這種miRNA活性增加的表型后果，有可能發(fā)現(xiàn)miRNA的功能。 （1）LNA修飾mimic
訂購信息： ③ miRNA Target Site Blockers
利用靶位點阻斷劑（Target Site Blockers）發(fā)揮miRNA的功能，miRNA通常會調(diào)節(jié)多個靶標(biāo)的基因表達(dá)，并且抑制miRNA會導(dǎo)致所有這些靶標(biāo)的抑制。因此，miRNA抑制后觀察到的表型是幾個靶標(biāo)阻遏作用的綜合結(jié)果。然而，放松對這些靶標(biāo)中的一些靶標(biāo)通常會顯著地影響表型。識別這些靶標(biāo)對于理解miRNA的功能至關(guān)重要。靶位點阻斷劑使研究人員能夠研究miRNA對單個靶標(biāo)的作用。 使用靶標(biāo)封閉劑研究 microRNA 的目標(biāo)區(qū)域，從分子角度更有針對性的研究 microRNA 功能。單個目標(biāo)對所獲得的表型的作用可以通過目標(biāo)位點阻斷劑(TSB)進(jìn)行研究，特異性地阻止了microRNA與其中一個RNA靶點的相互作用。 
產(chǎn)品特征：
· 定制設(shè)計的目標(biāo)位點阻斷劑，用于特異性抑制 miRNA 目標(biāo)
· 精巧的設(shè)計和卓越的高親和力，無論目標(biāo)序列如何
· 無與倫比的體外和體內(nèi)功效
· 由于缺乏依賴于 RNase H 的 mRNA 降解，無與倫比的性能和高蛋白表達(dá)
· 在非常低的濃度下有效，在目標(biāo)位點上勝過 miRNA
· 具有持久反義活性的卓越生物穩(wěn)定性 訂購信息： | 產(chǎn)品 | 說明 | 貨號 | | miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blocker | 體外5nmol，具有不同的標(biāo)簽和純化選項，以管形式提供 | 339199 | | 339201 |
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五、LNA檢測探針--NB及原位雜交
① LNA檢測探針 — Northern Blotting及原位雜交
針對mRNA、lncRNA或miRNA的定位檢測，Exiqon可提供LNA檢測探針，序列特異性強，靈敏度高、探針標(biāo)記方式靈活多樣，尤其適合用于Northern Blotting和原位雜交實驗，可滿足研究者的不同實驗需求。 LNA鎖核酸探針核心優(yōu)勢
● 無與倫比的靈敏性和特異性
● 可檢測所有已知的mRNA、lncRNA、microRNA，并可支持定制
● Tm均一化探針可實現(xiàn)ISH multiplexing及自動化
● 可提供無標(biāo)記，預(yù)置標(biāo)記及訂制標(biāo)記形式的探針
● 與放射性及非放射性方法兼容
● 適用于多種樣本類型 LNA探針已經(jīng)成功的使用在多種樣本類型中（見圖1），包括整體樣本（whole-mount），單細(xì)胞，冷凍切片及FFPE組織樣本等。對于FFPE樣本，我們推薦使用miRCURYLNA microRNA ISH Optimization Kits進(jìn)行優(yōu)化來調(diào)整自己探針的最佳使用量和試劑配比，從而確保自身探針實驗的成功。 
圖1：LNA探針已經(jīng)成功的使用在多種樣本類型中
訂購信息 | 產(chǎn)品 | 說明 | 貨號 |
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| | miRCURY LNA miRNA Custom Detection Probes | 1 nmol 或 10 nmol 不同標(biāo)記的定制miRCURY LNA miRNA檢測探針 | 339116 |
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| | miRCURY LNA miRNA Detection Probes | 1 nmol 或 10 nmol 不同標(biāo)記的miRCURY LNA miRNA檢測探針 | 339112 | | Custom LNA mRNA Detection Probes | 250 nmol 或 1 umol 合成劑量不同標(biāo)記的LNA mRNA探針 | 339501 | | Control for Custom LNA mRNA Detection Probes | 5 nmol Custom LNA mRNA對照探針 | 339450 | | miRCURY LNA miRNA ISH Optimization Kit (FFPE) | 進(jìn)行miRNA ISH 實驗建立及條件優(yōu)化 | 339459 |
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六、miRNA 相關(guān)轉(zhuǎn)染
① 基于脂質(zhì)分子的轉(zhuǎn)染試劑--HiPerFect Transfection Reagent （貨號：301705）
● 低至 10 pM siRNA的高效轉(zhuǎn)染
● 實現(xiàn)低濃度siRNA的使用，最大限度減少脫靶效應(yīng)
● 多種貼壁和懸浮細(xì)胞，以及原代細(xì)胞系已經(jīng)利用 HiPerFect Transfection Reagent成功轉(zhuǎn)染（精選細(xì)胞系詳見表1）。
● siRNA 的轉(zhuǎn)染可能引起脫靶效應(yīng)，產(chǎn)生非特異性的RNAi實驗結(jié)果。使用低濃度的siRNA，可大大降低脫靶效應(yīng)。有了HiPerFect Transfection Reagent，低至10 pM siRNA也能觀察到高效的轉(zhuǎn)染和沉默，讓等量的siRNA可用于更多實驗（圖1）。 表1 成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系 | 細(xì)胞系 | 細(xì)胞類型 | 所使用的siRNA濃度（實使Knockdown%) | | K562 | 人慢性髓性白血病細(xì)胞 | 5nM(85%) | | Jurkat | 人T細(xì)胞 | 75nM(83%) | | D1.1 | 人T細(xì)胞 | 50nM(84%) | | RAW 264.7 | 小鼠巨噬細(xì)胞 | 25nM(77%) | | J774.A1 | 小鼠巨噬細(xì)胞 | 50nM(97%) | | PMA-di?erentiated THP-1 | 人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞 | 5nM(82%) | | MEL | 鼠紅白血病細(xì)胞 | 5?20nM(50?70%) |
圖1. 皮摩爾siRNA的高效轉(zhuǎn)染。利用HiPerFect Transfection Reagent (3μl),在24孔板中用各種量的CDC2 siRNA和非沉默對照siRNA（對照）轉(zhuǎn)染HeLaS3細(xì)胞。48小時后，通過實時定RT-PCR分析CDC2的表達(dá)。
② PEI陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑-- INTERFERin? （貨號：101000036、101000028）更少的siRNA，更高的沉默效率，降低脫靶效應(yīng)！
● 高效基因沉默效率：在多種細(xì)胞中達(dá)到超過90%的基因沉默
● 極低的脫靶效應(yīng)：使用低至1nM siRNA
● 溫和的轉(zhuǎn)染模式：保持卓越的細(xì)胞活率
● 操作簡單：兼容血清和抗生素
圖注：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作手冊在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的3LL細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)染 
圖注：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作手冊在CaSKi細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)染 ③ 活體轉(zhuǎn)染方案---in vivo-jetPEI?（貨號：101000040、101000030）
注射型轉(zhuǎn)染試劑，用于基因治療和疫苗！
in vivo-jetPEI?的優(yōu)勢：
● 使用便捷：兩步操作
● 給藥方便：可用于各種注射途徑，以達(dá)目標(biāo)
● 量身定制：專家優(yōu)化的操作方案 in vivo-jetPEI?的介紹：
● 適用于任何動物模型的DNAsi/sh/miRNA活體轉(zhuǎn)染
● 享有盛名：最先進(jìn)的活體轉(zhuǎn)染技術(shù)，引用文獻(xiàn)超過700篇
● 成功的產(chǎn)物：從基礎(chǔ)研究到人臨床研究（提供GMP級產(chǎn)品） 
圖注：使用in vivo-jetPEI?在動物模型上的各種給藥途徑
七、miRNA文庫構(gòu)建 ① QIAseq miRNA Library Kit（貨號：331502、331505）
基于分子條形碼技術(shù)的高精度特異性小RNA快速測序文庫構(gòu)建文案
● 采用分子條形碼（UMI）技術(shù)用于擴增偏倚的去除
● 最低僅需1ng總RNA，可僅依靠試劑盒內(nèi)含的磁珠進(jìn)行純化而無需切膠回收
● 可用于miRNA，piRNA等Small RNA的表達(dá)分析以及全新Small RNA的發(fā)現(xiàn)
● 基于qPCR的獨特miRNA QC系統(tǒng)及外源參照，可用于樣本質(zhì)量以及測序后NGS線性度和可重復(fù)性的評估 
圖注：“gel-free”小RNA快速文庫構(gòu)建流程
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