對(duì)于非無(wú)菌產(chǎn)品，更直接的關(guān)注點(diǎn)應(yīng)該是致病菌的種類而非絕對(duì)數(shù)量。例如，不同產(chǎn)品所涉及的一些微生物如下：

    以上提到的是“指示生物（indicator organisms）”，它們代表了具有同等風(fēng)險(xiǎn)的其他生物，即使物種本身沒有在這些指示生物列表里。法規(guī)要求制藥公司要確保其產(chǎn)品符合一定的標(biāo)準(zhǔn)，以保證其質(zhì)量和安全性。這些標(biāo)準(zhǔn)通常包括檢測(cè)和控制微生物污染的要求。為了滿足這些要求，制造商需要制定自己關(guān)注的生物清單。

    法規(guī)要求制藥廠商防止產(chǎn)品被[KM1] 不可接受微生物污染（美國(guó)：CFR 211.113和21 CFR 211.165；歐洲：歐洲藥典Ph Eur. 5.1.4）。藥典中指定了一些不可接受微生物，但并不代表全部，根據(jù)產(chǎn)品性質(zhì)、給藥途徑和目標(biāo)患者群體的不同，可能存在其他不可接受微生物。預(yù)計(jì)將對(duì)產(chǎn)品中其他微生物的重要性進(jìn)行評(píng)估(根據(jù)主要藥典)。

    美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局CFRS中提供了大部分與“不可接受”微生物有關(guān)的信息，其中規(guī)定：

·21 CFR 211.84（d）（6）“鑒于其預(yù)期用途，每批可能存在不可接受微生物的污染情況，則需要在使用前對(duì)成分、藥品容器或封閉物都應(yīng)進(jìn)行微生物測(cè)試?！?o:p>

·21 CFR 211.113（a）“應(yīng)制定并遵循適當(dāng)?shù)臅娉绦?，以防止非無(wú)菌藥品中出現(xiàn)不可接受微生物。”

·21 CFR211.165（b）“必要時(shí)，對(duì)要求不含不可接受微生物的每批藥品進(jìn)行必要的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)?！?o:p>

    為了識(shí)別不可接受微生物并及時(shí)處理污染的情況，制造廠商應(yīng)進(jìn)行基于風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估，涉及受過(guò)微生物學(xué)和數(shù)據(jù)解釋專業(yè)培訓(xùn)的人員。除了在菌株出現(xiàn)時(shí)進(jìn)行處理外，建議主動(dòng)進(jìn)行評(píng)估生成一份不可接受微生物的文件清單，并將這些清單應(yīng)酌情納入程序和內(nèi)部規(guī)范。

對(duì)于非無(wú)菌產(chǎn)品，必須評(píng)估其他重要類型的污染，還有其他可能會(huì)增加或降低污染的風(fēng)險(xiǎn)的因素，例如產(chǎn)品的水活度。由于本文的目的是環(huán)境監(jiān)測(cè)，因此沒有詳細(xì)討論與實(shí)際產(chǎn)品相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素。

    不同類型的藥品受到微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)不同（如前所述，如何確定在某程度上成為一種嚴(yán)重的風(fēng)險(xiǎn)，需要對(duì)微生物進(jìn)行“不可接受的”評(píng)估），注意不要過(guò)于籠統(tǒng)，例如在處理干粉混合、造粒和干燥以及最終裝袋或壓片的生產(chǎn)過(guò)程中，環(huán)境對(duì)產(chǎn)品的污染主要風(fēng)險(xiǎn)來(lái)自細(xì)菌芽孢和真菌孢子。這種污染源于環(huán)境的灰塵以及操作員身上的脫落物，而良好的操作和通風(fēng)控制可以將交叉污染降至最低（W€urtz，Sigsgaard，Valbj?rn，Doekes，&Meyer，2005）。

    有關(guān)生產(chǎn)干燥產(chǎn)品（如片劑）的風(fēng)險(xiǎn)可能會(huì)在后續(xù)的生產(chǎn)階段重復(fù)出現(xiàn)，對(duì)水溶性造粒和干燥來(lái)說(shuō)，若干燥不及時(shí)進(jìn)行或者采用長(zhǎng)時(shí)間的溫度托盤干燥，可能會(huì)造成問(wèn)題。原材料中的微生物可能在托盤干燥階段增殖。但隨著水活性降低，這些微生物有可能在干燥過(guò)程中死亡。

    在考慮風(fēng)險(xiǎn)時(shí)應(yīng)注意到，壓片所涉及的機(jī)械力和熱量往往足以破壞真菌孢子和營(yíng)養(yǎng)體細(xì)菌。然而，細(xì)菌芽孢可以在這個(gè)過(guò)程中存活下來(lái)。

    環(huán)境微生物污染到產(chǎn)品中并不一定意味著產(chǎn)品會(huì)對(duì)患者造成傷害或環(huán)境將面臨永久性風(fēng)險(xiǎn)。微生物污染的結(jié)局可能有一下幾種：

·微生物可能會(huì)死亡；

·微生物在不增殖的情況下存活；

·微生物可能代謝、生長(zhǎng)和增殖；

·微生物可以被轉(zhuǎn)移；

進(jìn)一步討論風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，還應(yīng)該考慮的幾個(gè)因素包括（Sutton，2012）：

·產(chǎn)品的性質(zhì)-產(chǎn)品能否支持微生物生長(zhǎng)嗎？它是否含有有效濃度的抗菌防腐劑？產(chǎn)品是液態(tài)的還是無(wú)水的？

·微生物是否可在產(chǎn)品中長(zhǎng)期存活？

·微生物的性質(zhì)-該微生物是條件性致病菌嗎？在給藥部位引入這種微生物會(huì)對(duì)患者產(chǎn)生不利影響嗎？微生物本身是否是一個(gè)指示劑，指示其他偶然沒有檢測(cè)到的致病菌？請(qǐng)記住，一些微生物應(yīng)被視為指示菌，它們預(yù)示著受到不可接受微生物的污染。例如，即使沒有檢測(cè)到大腸桿菌，腸桿菌科的存在也可能表明存在大腸桿菌污染的風(fēng)險(xiǎn)。

·被回收的微生物的絕對(duì)數(shù)量。

·微生物毒素——微生物是否可能釋放出一種毒素（外毒素、腸毒素或內(nèi)毒素），即使該微生物不再存活，是否對(duì)病人會(huì)造成傷害？

·產(chǎn)品給藥途徑—與給藥途徑相關(guān)的危害有哪些？目標(biāo)部位是否正常狀態(tài)下下無(wú)菌？

·預(yù)期的接受者—該產(chǎn)品是否會(huì)用于免疫功能低下的患者？病人目前是否患有任何疾病或開放性傷口？

·使用其他藥物——是指患者目前正在使用其他可能導(dǎo)致免疫力下降的藥物？

    因此，許多環(huán)境監(jiān)測(cè)都是對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是風(fēng)險(xiǎn)的嚴(yán)重程度x風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生的概率。一個(gè)良好的檢測(cè)系統(tǒng)可以降低風(fēng)險(xiǎn)，并且關(guān)系到一個(gè)穩(wěn)定的環(huán)境監(jiān)測(cè)程序。鑒于所涉及的抽樣規(guī)模較小，實(shí)際測(cè)試的產(chǎn)品很少，這使得風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估更加復(fù)雜，這種局限性在無(wú)菌檢查中尤為明顯，因?yàn)闊o(wú)菌檢查只能檢測(cè)到發(fā)生大量的污染的情況。

    當(dāng)使用風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)，特別是對(duì)于無(wú)菌產(chǎn)品，重要的是不要區(qū)分可能導(dǎo)致疾病的微生物和被認(rèn)為是良性的微生物，因?yàn)槿魏挝⑸锒伎赡軐?dǎo)致免疫低下個(gè)體的感染。重要的是環(huán)境的趨勢(shì)和產(chǎn)品污染的可能性。

    微生物污染的來(lái)源多種多樣，通?？梢苑譃樗拇箢悾⊿andle & Vijayakumar，2014）：

    ·空氣

    ·水

    ·制造設(shè)備；表面和消耗品

    ·人員

    污染經(jīng)常以組合形式出現(xiàn)。例如，在潔凈室中，在同一事件中，不同比例的空氣、人員和設(shè)備都可能發(fā)生污染的情況。

空氣

    大多數(shù)制造區(qū)域的空氣都被微生物“污染”(包含微生物)，盡管污染程度會(huì)有所不同：辦公室中每立方米空氣中的微生物數(shù)量要比歐盟GMP級(jí)/ISO 7級(jí)(動(dòng)態(tài))潔凈室中同等體積的空氣中的微生物數(shù)量多得多。雖然空氣是微生物的載體，但它并不是一個(gè)營(yíng)養(yǎng)環(huán)境。因此，空氣中的許多微生物會(huì)因干燥或光敏而死亡，并且許多其他微生物是厭氧的，在空氣中無(wú)法存活或增殖。

    雖然不能增殖，有些細(xì)菌仍然可以在空氣中存活。典型的是這些形成芽孢的細(xì)菌，如芽孢桿菌Bacillus spp.；其他革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，如微球菌Micrococcus spp.和一些真菌，也可以在氣流中存活。

    空氣中的細(xì)菌通常與塵埃顆粒和皮屑同時(shí)存在，而不是以單個(gè)微生物形式存在。皮屑通常為33-44 μm， 通常會(huì)分解到20到10 μm之間（這對(duì)于評(píng)估空氣中顆粒物含量很重要，如后所述）。當(dāng)考慮空氣中細(xì)菌的污染風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，重要的是其沉積到關(guān)鍵表面上的潛力。風(fēng)險(xiǎn)集中在空氣速度和氣流上。

    空氣過(guò)濾可以解決潔凈室中空氣的污染風(fēng)險(xiǎn)的問(wèn)題（空氣過(guò)濾的有效性是通過(guò)不同等級(jí)空氣過(guò)濾器及其捕獲空氣中不同水平和大小顆粒物的能力來(lái)衡量）。其他預(yù)防措施包括氣流和壓差設(shè)計(jì)（從最潔凈的房間流向較低清潔度的房間），由于微生物不能逆氣流移動(dòng)，這種方法是可以防止微生物的再污染。

    真菌孢子更容易在空氣中傳播。所有真菌（含酵母、絲狀真菌和雙態(tài)屬）都能產(chǎn)生孢子。絲狀真菌的生長(zhǎng)過(guò)程是通過(guò)產(chǎn)生菌絲（管狀分支），菌絲以團(tuán)狀（稱為菌絲體）向多個(gè)方向擴(kuò)展。一些菌絲分支生長(zhǎng)到空氣中，x在這些氣生分支上形成孢子（Nazaroff，2004）。

    ，大多數(shù)真菌孢子的用途是繁殖。真菌通常根據(jù)其產(chǎn)生孢子的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分類，例如，孢子由子囊產(chǎn)生是子囊菌的特征，這類真菌通常在一個(gè)子囊中產(chǎn)生4-8個(gè)孢子，子囊類似于一個(gè)“豌豆莢”狀的結(jié)構(gòu)，它能容納孢子，并在環(huán)境條件適合時(shí)釋放孢子。

    真菌孢子可以傳播相當(dāng)遠(yuǎn)的距離。與細(xì)菌芽孢不同，真菌孢子更容易被氣流中攜帶，因此可以廣泛傳播；在像潔凈室這樣的封閉空間內(nèi)，孢子很容易擴(kuò)散到整個(gè)潔凈室。而真菌孢子的傳播距離，受到真菌和孢子的大小的限制（空氣動(dòng)力學(xué)直徑很重要，因?yàn)轭w粒的動(dòng)力學(xué)特性隨其大小和環(huán)境的條件而變化）。

    傳播的距離和方向取決于擴(kuò)散力以及是否有其他載體在起作用，例如氣流或水滴。人造環(huán)境中的一個(gè)問(wèn)題是大多數(shù)孢子會(huì)在最佳條件下發(fā)芽（真菌孢子比細(xì)菌芽孢更容易萌發(fā)）。

    除了用于繁殖的孢子外，一些真菌也會(huì)產(chǎn)生第二種類型的孢子——厚壁孢子。厚壁孢子是休眠孢子，能夠在不利條件下生存（如炎熱干燥的環(huán)境條件、缺乏營(yíng)養(yǎng)、滲透壓變化以及惡劣的pH和化學(xué)物質(zhì)）。這些孢子通常是無(wú)性繁殖的結(jié)果，能夠在潔凈室等環(huán)境中存活。

    當(dāng)孢子/芽孢進(jìn)入潔凈室時(shí)，一部分會(huì)萌發(fā)，還有許多真菌孢子會(huì)保持孢子狀態(tài)，等待有利的條件。由于漏水（例如密封件漏水）對(duì)潔凈室部分造成損壞，孢子則有可能在損壞處存活。同時(shí)，乙烯基材料下面存在的水會(huì)造成真菌生長(zhǎng)和繁殖。研究表明，真菌在有水的地方可以很好地生長(zhǎng)，存活時(shí)間更長(zhǎng)（當(dāng)然沒有證據(jù)表明真菌在空氣中生長(zhǎng)或可以利用空氣促進(jìn)生長(zhǎng)）。真菌的存在與灰塵也有關(guān)系；在有水和灰塵顆粒的地方，真菌的存活率更高。這些都加劇了真菌孢子會(huì)成為潔凈室的一個(gè)特殊問(wèn)題（Sandle，2014）。

水

    潔凈室的第二個(gè)污染源是水。水既是污染的載體，也是污染的來(lái)源。水污染比空氣污染的問(wèn)題更嚴(yán)重，因?yàn)樗廴静粌H僅使得微生物留在潔凈室內(nèi)，而且還增加潔凈室內(nèi)微生物數(shù)量（促進(jìn)微生物增殖）。細(xì)菌細(xì)胞分裂或細(xì)菌細(xì)胞群翻倍所需的時(shí)間間隔稱為倍增時(shí)間。在自然界中生長(zhǎng)的細(xì)菌種類的倍增時(shí)間可短至15分鐘（尤其是革蘭氏陰性菌）。通常情況下，水在制藥過(guò)程中是必需的，因?yàn)樗枰鳛榕淞?、清潔劑、消毒劑的稀釋劑，并被用作蒸汽和水蒸氣?o:p>

    水在制藥工業(yè)中無(wú)處不在，是藥物配方和工藝中最常見的原料，還用于不同的設(shè)備清洗和漂洗過(guò)程。未遵守GMP標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，水可能成為微生物污染的主要來(lái)源。在加工、驗(yàn)證和生產(chǎn)過(guò)程中，需要對(duì)水樣進(jìn)行分析，以確定設(shè)備用水的微生物質(zhì)量。制藥設(shè)施中常用的水有三種。具體如下：

飲用水：例如，用于清潔和洗手；

純化水：例如，用于現(xiàn)場(chǎng)清潔系統(tǒng)；

注射用水：例如，用于設(shè)備和產(chǎn)品配方的最終沖洗。

    水可能是嚴(yán)重的污染源，尤其是革蘭氏陰性桿菌，即使在低營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)下也會(huì)生長(zhǎng)和增殖。因此，小面積的積水或潮濕區(qū)域可能會(huì)成為污染源，典型的革蘭氏陰性細(xì)菌包括不動(dòng)桿菌屬（Acinetobacter spp.）、大腸桿菌（E. coli）和假單胞菌屬（Pseudomonas spp.）一些微生物只需要極低濃度的有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)即可生長(zhǎng)和增殖，如假單胞菌屬（Pseudomonas spp.）。這些微生物總是存在于殘留的水和潮濕的區(qū)域中。

材料和表面

    潔凈室中的表面因空氣沉降和直接接觸而受到污染。因?yàn)榭梢酝ㄟ^(guò)一些物理或者化學(xué)方式將微生物從表面清除，微生物沉積到表面的風(fēng)險(xiǎn)存在一些差異。因此，在考慮表面污染的可能性時(shí)，需要考慮到有時(shí)微生物可能不會(huì)長(zhǎng)時(shí)間與表面接觸。除表面污染外，進(jìn)入潔凈室的材料和設(shè)備也可能存在風(fēng)險(xiǎn)。

    潔凈室的狀態(tài)與空氣或水等因素侵入潔凈室的可能性以及設(shè)施對(duì)事件做出有效清潔和消毒計(jì)劃的能力有關(guān)（因?yàn)槭軗p的表面更難清潔和消毒）。這還取決于特定設(shè)施的維護(hù)情況，盡管隨著設(shè)施的老化，維護(hù)設(shè)施變得更加困難（這是一個(gè)無(wú)法確定的時(shí)間，在制藥背景下，超過(guò)25年的設(shè)施可能被合理地定義為老化）（Sandle，2016）。關(guān)于老化的話題，見我們往期文章《制藥設(shè)施潔凈室老化的風(fēng)險(xiǎn)考慮》。

    “材料 ”是一個(gè)包羅萬(wàn)象的術(shù)語(yǔ)，指進(jìn)入制藥環(huán)境中的物品。環(huán)境中最大的風(fēng)險(xiǎn)來(lái)自于材料進(jìn)出潔凈室，應(yīng)始終對(duì)轉(zhuǎn)移的情況進(jìn)行控制和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估（環(huán)境監(jiān)測(cè)設(shè)備等設(shè)備的轉(zhuǎn)移作為可能的污染源也不容忽視）。

    位于潔凈室的材料應(yīng)采用易于清潔和消毒的設(shè)計(jì)。需要考慮的因素包括表面是否光滑，重要的是要確保材料和設(shè)備運(yùn)行時(shí)各個(gè)方面都應(yīng)處于適當(dāng)?shù)那鍧嵵贫戎隆?o:p>

    原料中有時(shí)會(huì)含有細(xì)菌芽孢，尤其是較干燥的物質(zhì)。一般來(lái)說(shuō)，合成材料的細(xì)菌數(shù)量較少，但也可能含有芽孢，天然來(lái)源的干粉更有可能含有大量芽孢。因此，應(yīng)從經(jīng)認(rèn)可的供應(yīng)商處購(gòu)買此類材料，進(jìn)行適當(dāng)?shù)闹甘旧餃y(cè)試（對(duì)于某些風(fēng)險(xiǎn)材料，可能需要添加芽孢桿菌測(cè)試來(lái)作為USP指定微生物的補(bǔ)充）。

    除化學(xué)品外，包裝--尤其是紙板--可能含有芽孢桿菌Bacillus。應(yīng)避免將紙板帶入潔凈室設(shè)施。與此相反，層壓板、金屬箔和吸塑材料都具有光滑的不透水表面，且在制造過(guò)程中經(jīng)過(guò)了高溫處理，因此表面微生物含量較低。（Tang， Kuehn， & Simcik， 2015）。

    藥品加工的來(lái)料應(yīng)在轉(zhuǎn)運(yùn)到加工區(qū)之前對(duì)其進(jìn)行控制，其中一個(gè)關(guān)鍵方面是儲(chǔ)存，確保儲(chǔ)存容器周圍有足夠的通風(fēng)。如果外包裝受潮，通風(fēng)可使其干燥。在轉(zhuǎn)移到核心生產(chǎn)區(qū)時(shí)，仍有可能出現(xiàn)外包裝交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)，可以通過(guò)有效的空氣處理系統(tǒng)將這種風(fēng)險(xiǎn)降至最低（Payne，2007年）。

    另一個(gè)值得關(guān)注的區(qū)域是機(jī)械維護(hù)的不善，這也可能是真菌孢子和細(xì)菌芽孢的來(lái)源。修復(fù)損壞設(shè)施應(yīng)成為設(shè)施生物污染修復(fù)戰(zhàn)略的一部分，例如，過(guò)濾器磨損或損壞，可能會(huì)將空氣吹到設(shè)施周圍；第二個(gè)方面是維護(hù)操作，例如打開機(jī)器上的面板，設(shè)備的內(nèi)部區(qū)域——尤其是那些通常不暴露在潔凈室環(huán)境中的區(qū)域，可能是污染源。

人

    關(guān)于人還是水是潔凈室中最主要的污染源，是有爭(zhēng)議的。當(dāng)然，人是一個(gè)主要的污染源，因?yàn)樗械娜硕紨y帶微生物，即使是最“全面包裹”的防護(hù)服也無(wú)法完全避免微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。人是一個(gè)高度可變和不可預(yù)測(cè)的微生物來(lái)源，因?yàn)橐粋€(gè)可能會(huì)在某一天人的行為增加污染風(fēng)險(xiǎn)，但第二天卻不會(huì)。

    人體的微生物生態(tài)學(xué)是復(fù)雜的，形成人體微生物群落的許多微生物種類是未知的。隨著時(shí)間的推移，在人身體上不同位置之間、不同的人之間物種的多樣性差異相當(dāng)大，但還是有一些屬的細(xì)菌具有普遍代表性。當(dāng)將人類皮膚細(xì)菌生物群的研究與已發(fā)表的潔凈室微生物研究進(jìn)行比較時(shí)，潔凈室中常見的微生物與那些在人類皮膚上短暫、短期或長(zhǎng)期存在的微生物之間存在一定的關(guān)聯(lián)。

  典型的來(lái)自人類的微生物污染包括丙酸桿菌屬Propionibacteriumspp.、葡萄球菌屬Staphylococcus spp、鏈球菌屬Streptococcus spp.和微球菌屬M(fèi)icrococcusspp.，這些微生物從人的頭發(fā)、皮膚、眼睛和其他粘液膜中脫落。通常情況下，這些微生物會(huì)飄散到空氣中，通過(guò)手接觸傳播也是一個(gè)常見的風(fēng)險(xiǎn)。（Sandle，2012a）。

    借助人類微生物組項(xiàng)目（2008-2013年）的工作，我們對(duì)人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的微生物有了更深入的了解。人類微生物組項(xiàng)目（HMP）始于2008年，是美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究院的倡議。這個(gè)持續(xù)進(jìn)行的項(xiàng)目的核心目標(biāo)是通過(guò)培養(yǎng)技術(shù)、宏基因組學(xué)和全基因組測(cè)序的結(jié)合，鑒定和描述與健康和患病人類（人類微生物組）相關(guān)的微生物。藥品微生物學(xué)涉及許多方面，必須在藥物研發(fā)、生產(chǎn)和使用過(guò)程中加以考慮，以及在生產(chǎn)藥品的受控環(huán)境方面進(jìn)行考慮。

    通過(guò)單向氣流和隔離器保護(hù)關(guān)鍵區(qū)域，以及使用正確的潔凈室等級(jí)服裝和潔凈室規(guī)范，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)人員的控制。由于微生物的脫落隨著動(dòng)作的增加而增加，潔凈室規(guī)范應(yīng)確保人員接受充分的無(wú)菌技術(shù)和操作培訓(xùn)，例如與操作和行走相關(guān)的行為進(jìn)行培訓(xùn)。微生物的脫落也會(huì)隨著移動(dòng)的增加而增加，快速移動(dòng)也會(huì)增加微生物通過(guò)氣流擴(kuò)散的可能性。在歐盟GMP A級(jí)/ISO 5級(jí)環(huán)境中，這些行為規(guī)范非常重要，例如緩慢移動(dòng)、盡量減少談話和熟練的操作。因此，操作員培訓(xùn)應(yīng)成為重點(diǎn)。

     制藥環(huán)境的控制對(duì)于整個(gè)微生物控制非常重要。特別是芽孢桿菌和真菌孢子，控制應(yīng)以良好的潔凈室設(shè)計(jì)為中心，重點(diǎn)是盡量減少空氣污染?？諝庵械奈廴疚镏饕擎咦?，以及隨個(gè)體皮屑而脫落的其他生物。空氣控制是通過(guò)空氣過(guò)濾和確保潔凈室內(nèi)良好的紊流氣流（以及柜內(nèi)所需的單向氣流）來(lái)實(shí)現(xiàn)的。不同潔凈度等級(jí)的房間應(yīng)有不同的壓差，以防止“較臟”區(qū)域的空氣進(jìn)入“較干凈”區(qū)域。

    工作人員也可通過(guò)衣物將孢子帶入潔凈室。所以制藥廠應(yīng)提供足夠的更衣設(shè)施，使工作人員能夠在進(jìn)出潔凈室時(shí)進(jìn)行有效的更衣。在潔凈室服裝可能被重新穿戴的情況下（例如非無(wú)菌生產(chǎn)），應(yīng)規(guī)定更衣方法，以免工作人員污染工廠服裝。

    在對(duì)產(chǎn)（芽）孢菌類進(jìn)行控制的情況下，設(shè)施設(shè)計(jì)不足可能導(dǎo)致產(chǎn)（芽）孢菌類仍未被發(fā)現(xiàn)，從而在未來(lái)帶來(lái)污染風(fēng)險(xiǎn)。特別值得關(guān)注的是表面的缺損，表面的損壞會(huì)造成芽孢/孢子在其中定居和存留，表面的設(shè)計(jì)應(yīng)盡量減少污染，并易于清潔和消毒；例如，使用設(shè)計(jì)耐化學(xué)腐蝕的表面。

    維修和保養(yǎng)應(yīng)延伸到設(shè)施的所有區(qū)域，包括冷西藏域。所有種類的芽孢桿菌都能在低溫下存活，有些還能生長(zhǎng)。例如，嗜冷的蠟樣芽孢桿菌（B. cereus）菌株可以在商業(yè)制冷溫度（2–8℃）下生長(zhǎng)（Daelman，Vermeulen，Willemyns等人，2013）。

    細(xì)菌芽孢和真菌孢子經(jīng)常通過(guò)灰塵污染被引入制藥領(lǐng)域，因此，對(duì)建筑物進(jìn)行任何結(jié)構(gòu)改造或不加控制的清掃都可能導(dǎo)致這些污染物殘留在附近。一個(gè)值得關(guān)注的問(wèn)題是潔凈室織物的損壞，例如乙烯基織物的破損。因此，在設(shè)施停工期間應(yīng)采取嚴(yán)格的控制措施。在潔凈室和受控環(huán)境中，可能產(chǎn)生孢子風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域包括:

·門后板

·袋子

·培養(yǎng)箱

·箱子

·手推車輪

·天花板吊頂

·劣質(zhì)的地板

·施工震動(dòng)

·照明裝置

·有缺陷的暖通空調(diào)系統(tǒng)(像枝孢菌屬（Cladosporiumspp.）的真菌可能位于鼓風(fēng)機(jī)輪扇葉片、管道系統(tǒng)和冷卻盤管散熱片中; 其他真菌可能位于滴水盤以及空氣加濕器和冷卻塔中)。

    大致有兩種糾正活動(dòng)。第一個(gè)是解決源頭并加以糾正。第二個(gè)是復(fù)原區(qū)域，包括進(jìn)行修復(fù)和實(shí)施有效的清潔和消毒制度。后者包括選擇合適的消毒劑，通常是殺孢子劑，并且已證明對(duì)表面的真菌孢子有效（Lopolito，Bartnett，&Polarine，2007）。

    在應(yīng)對(duì)問(wèn)題方面，一個(gè)常見的關(guān)注點(diǎn)是濕潤(rùn)區(qū)域或因漏水而受損的區(qū)域。潔凈室人員應(yīng)該迅速對(duì)設(shè)施內(nèi)的水漬進(jìn)行反應(yīng)，并快速處理或更換受損的墻壁和天花板。

    即使采取了其他控制措施，仍存在微生物污染風(fēng)險(xiǎn)。為了防止出現(xiàn)這種情況，需要加強(qiáng)清潔和消毒措施。有些微生物對(duì)惡劣的物理和化學(xué)條件具有抗性；如果消毒措施無(wú)效，它們就很難被清除。（Haberer，2008）。

    在清潔和消毒方面值得考慮的一些要點(diǎn)（Sandle，2012b）：

1.清潔劑的重要性：是否在使用消毒劑之前使用清潔劑？這是一個(gè)必要的步驟，因?yàn)樵S多消毒劑的滲透能力很差，需要去除土壤屏障才能接觸到微生物。

2.清潔措施的有效性很重要。清潔劑和消毒劑都需要擦到表面才能有效。

3.洗滌劑和消毒劑的配制。重要的是要檢查是否使用“無(wú)菌”水，以免在清潔溶液中引入高生物負(fù)載。此外，應(yīng)選擇適用于潔凈室的拖把和水桶（在無(wú)菌設(shè)施的情況下，潔凈室物品應(yīng)無(wú)菌）。

4.在考慮產(chǎn)（芽）孢菌類帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，最重要的是是否常規(guī)使用殺孢子消毒劑。定期使用殺孢子劑非常重要，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)消毒劑，如醇類、季銨化合物、酚類和兩性表面活性劑，對(duì)處于營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的細(xì)菌有效，但對(duì)芽孢無(wú)效。盡管芽孢狀態(tài)本身不能引起感染，但在適當(dāng)?shù)臈l件下，芽孢桿菌的芽孢能在幾分鐘內(nèi)萌發(fā)（芽孢萌發(fā)的速率和程度取決于菌株、處理和環(huán)境等因素）。

5.具有殺孢活性的生物殺菌劑包括次氯酸鹽和過(guò)氧化氫/過(guò)乙酸混合物。

6.用于常規(guī)消毒程序的消毒劑必須合格，以證明其能夠減少表面的已知微生物數(shù)量，這種評(píng)估應(yīng)使用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行。

    嚴(yán)格遵守良好的清潔和消毒做法是至關(guān)重要的，對(duì)于許多微生物芽孢，特別是芽孢桿菌屬的芽孢，對(duì)設(shè)備表面具有很強(qiáng)的粘附性是由于以下原因（1）它們相對(duì)較高的疏水性，（2）芽孢表面電荷低，（3）獨(dú)特的形態(tài)（Ronner&Husmark，1992）。